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M-MLV (H-) Reverse Transcriptase
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北京百奥莱博科技有限公司
5000U
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销售逆转录酶优惠,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:逆转录酶优惠
规格:5000U
产地:国产|进口
英文名:M-MLV (H-) Reverse Transcriptase
品牌:百奥莱博
本品适用于第一链cDNA合成,cDNA 片段长度最高可达12kb。也可用于低拷贝基因的检测。野生型的M-MuLV包含RNase H活性,该活性可催化降解DNA/RNA杂合体中的RNA,因而在cDNA 第一条链的合成过程中可能会降解RNA/DNA杂合体中的模板RNA,本品为通过基因重组技术得到的点突变型RNase H活性缺失的逆转录酶,即M-MLV (H-) Reverse Transcriptase,与M-MuLV相比,不仅改善了模板RNA可能被降解情况,且具有更强的延伸能力和稳定性,可用于较长的cDNA合成以及高比例的全长cDNA文库的构建。
注意事项
1)为保证反转录成功,建议使用高质量的RNA样品。
2)请保持实验区域洁净;操作时需穿戴干净的手套、口罩;实验所用的离心管、枪头等耗材均需保证RNase free,以防止RNase污染。
3)如果RNA模板GC含量丰富或者具有复杂的二级结构,可以先只加RNA模板、引物和RNase free H2O混匀,65℃变性5min,冰上冷却,短暂离心后加入其他成分继续下面的反转录步骤。
4)为了您的健康,实验操作时请穿实验服和带一次性手套。
使用方法
1第一条链cDNA合成(以20μl反应体系为例)
1.1 按照表【1】配制反应体系
RNase free ddH2O | to 20μl |
5×Reaction Buffer | 4 μl |
dNTP Mixture (10 mM each) | 1 μl |
Oligo(dT)18(0.5μg/μl) | |
or Random hexamer (0.1μg/μl) | |
or GSP(Gene Speicific Primer)(2 μM) | 1 μl |
RNase inhibitor (40 U/μl) | 0.5 μl |
M-MLV (H-) Reverse Transcriptase | 1 μl |
模板RNA | Total RNA: 50ng-5μg mRNA: 5-500ng |
表1 cDNA第一条链合成反应体系表 |
cDNA模板 | 2μl | 依需要调整 |
Forward Primer (10μM) | 1μl | 0.2 μM each |
Reverse Primer (10μM) | 1μl | 0.2 μM each |
10×Taq Buffer(含Mg2+) | 5 μl | 1× |
2.5mM dNTPs | 4μl | 0.2 mM |
Taq DNA Polymerase | 0.5μl | 2.5units |
ddH2O to final volume | 50μl | / |
表2 RT-PCR反应体系表 |
Vial | 稀释液体积(μl) | 2mg/ml BSA体积(μl) | BSA终浓度(μg/ml) |
A | 0 | 100 | 2000 |
B | 25 | 75 | 1500 |
C | 50 | 50 | 1000 |
D | 125 | 75 | 750 |
E | 150 | 50 | 500 |
F | 350 | 50 | 250 |
G | 375 | 25 | 125 |
H | 395 | 5 | 25 |
I | 400 | 0 | 0=Blank |
表一BSA标准品体系配制(微孔板检测,线性范围20-2000μg/ml)* |
名称 | 耐受浓度 |
Sodium bicarbonate | 100 mM |
Sodium phosphate | 25 mM |
2-Mercaptoethanol | 0.01% |
Glycercol (pure) | 10% |
Glycine-HCl, pH 2.8 | 100 mM |
HEPES | 100 mM |
Hydrochloric acid | 100 mM |
Leupeptin | 10 mg/L |
Nickel chloride (in TBS, pH8.0) | 10 mM |
Nonidet P-40 (NP-40) | 5% (w/v) |
Octyl β -glucoside | 5% (w/v) |
Potassium thiocyanate |
3.0 M |
SDS | 5% |
Sodium acetate, pH 4.8 | 200 mM |
Sodium azide | 0.20% |
Sodium hydroxide | 100 mM |
Sucrose | 40% |
Triton X-100 | 5% |
Triton X-114, X-305,X-405 | 1% |
Tween-20, Tween-60, Tween-80 | 5% |
Zwittergent | 1% |
ACES, pH 7.8 | 25 mM |
Acetone | 10% |
Acetonitrile | 10% |
Ammonium sulfate | 1.5 mM |
Aprotinin | 10 mg/L |
Bicine, pH 8.4 | 20 Mm |
Bis-Tris, pH 6.5 | 33 mM |
Borate, pH 8.5 | 50 mM |
Brij-35 | 5% |
Brij-52 | 1% |
Brij-56, Brij-58 | 1% |
BugBuster protein Extraction Reagent |
no interference (undiluted) |
Calcium chloride (in TBS, pH 8.0) | 10 mM |
CelLytic B Reagent | no interference (undiluted) |
Cesium bicarbonate | 100 mM |
CHAPS | 5% |
Cobalt chloride (in TBS, pH 8.0) | 0.8 mM |
CytoBuster Protein Extraction Reagent |
no interference (undiluted) |
Deoxycholic acid | 5% |
Dithioerythritol (DTE) | 1 mM |
Dithiothreitol (DTT) | 1 mM |
DMF | 10% |
DMSO | 10% |
EDTA | 10 mM |
EPPS, pH 8.0 | 100 mM |
Ethanol | 10% |
Ferric chloride (in TBS, pH 8.0) | 10 mM |
Glucose | 10 mM |
Glycerol | 10% |
Guanidine-HCl | 4 M |
Imidazole, pH 7.0 | 50 mM |
MES, PH6.1 |
100mM |
Methanol | 10% |
MOPS, pH7.2 | 100mM |
N-Acetyglucosamine(10mM)in PBS, pH7.2 | 10mM |
Octyl β- thioglucpyranoside |
5% |
PIPES, pH6.8 | 100mM |
PMSF | 1 mM |
PopCulture Reagent (Cat. No. 71092) | no interference (undiluted) |
Reportasol Extraction Buffer | no interference (undiluted) |
Sodium chloride | 1 M |
Sodium citrate, pH 4.8 or pH 6.4 | 200 mM |
Sodium ortho-vanadate in PBS, pH7.2 | 1mM |
Span 20 | 1% |
TBS (150 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl, pH 8.0) | no interference (undiluted) |
Thimerosal | 0.01% |
TLCK | 0.1mg/L |
TPCK | 0.1mg/L |
Tricine, pH 8.0 | 25 mM |
Triethanolamine, pH 7.8 | 25 mM |
Tris | 250 mM |
Tris(hydroxypropyl)phosphine (THP) | 1 mM |
Urea | 3M |
Zinc chloride (in TBS, pH 8.0) | 10 mM |
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