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- 2025年07月15日
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文献和实验。加入甘氨酸可以消除甲醛使交联反应终止。1.1.准备两个长满细胞的150cm2的细胞培养皿（1*107-5*107 个细胞/皿）。将甲醛直接滴入PBS洗过的细胞培养皿中，使其终浓度为0.75%，然后在室温缓慢旋转10分钟，使蛋白和DNA发生交联。1.2 加入甘氨酸使其终浓度为125mM,在室温晃动孵育5分钟。1.3 使用10ml预冷PBS清洗细胞2次1.4 使用细胞刮将细胞收获放入 5ml 预冷PBS中，并转入50ml的管子。1.5.在皿里加入3mlPBS，将剩余的细胞转移到50ml管子里1000g
一、样品提取：三氯醋酸—丙酮沉淀法 （1） 在液氮中研磨叶片 （2） 加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm以上1 小时）弃上清。 （3） 加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上1小时），然后真空干燥沉淀，备用。 （4） 上样前加入裂解液，室温放置30 分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用
。3.3 IPG聚焦系统跑胶程序的设定（跑胶温度为20℃）S1 (30v,12hr,360vhs,step)S2 (500v,1hr,500vhs,step)S3 (1000v,1hr,1000vhs,step)S4 (8000v,0.5hr,2250vhs,Grad)S5 (8000v,5hr,40000vhs,step)共计44110vhs,19.5小时其中S1用于泡胀水化胶条，S2和S3用于去小离子，S4和S5用于聚焦3.4 平衡 用镊子夹出胶条,超纯水冲洗后，在滤纸上吸干（胶面，即接触样品那一面不能
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