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- KALANG
- 中国大陆
- KL0253
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
冷藏
- 保质期：
长期
- 英文名：
2×RNA Loading Buffer (With Ethidium Bromide)
- 库存：
大量
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
5×1ml
2×RNA上样缓冲液(含溴化乙锭)
英文名：2×RNA Loading Buffer (With Ethidium Bromide)规格：5×1ml
2×RNA上样缓冲液用于琼脂糖凝胶电泳或聚丙烯酰胺琼脂糖凝胶电泳前RNA 样本的处理。缓冲液组分经过优化，其中的染料溶液包括指示剂溴酚蓝和二甲苯青FF，电泳时可肉眼监控RNA 的迁移，并含有甲酰胺用作一种RNA稳定剂。
1×RNA loading buffer各组分：47.5% Formamide, 0.01%(w/v)SDS, 0.01%(w/v) Bromphenol Blue, 0.005%(w/v) Xylene Cyanol, 0.5mM EDTA, 0.0125%(w/v) Ethidium Bromide.
使用方法
1）将RNA样品与等体积的2×RNA上样缓冲液充分混匀。
2）对于变性PAGE(尿素)/Agarose凝胶电泳，需在65-70℃加热5-10min变性RNA，并在加热的同时用枪头吸取电泳缓冲液小心冲洗点样孔中多余的尿素；对于非变性PAGE/Agarose凝胶电泳则无需此步加热，直接进行下一步。
3）上样即可。
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文献和实验问：新买了GelRed，比较贵，打算用节约的方法来使用，也就是把GelRed预混在上样缓冲液里，和样品混合后上样电泳。因此想请教一下有经验的站友： 1 假定使用6X上样缓冲液，应该以多大比例混合GelRed？ 2 预混GelRed的上样缓冲液与核酸样品混合后，需要孵育一段时间还是可以直接上样？ 3 预混在上样缓冲液中的GelRed是否稳定，是否可以长期存放，以及存放条件是室温，4度
；用 3 倍柱容积的 DEPC-H2O 洗柱，再用 1×上样缓冲液洗柱，至洗出液 pH（2）将 RNA 溶液在 65 ℃ 加热 5 min，然后迅速冷却至室温，加入等体积的 2×上样缓冲液，混合后直接上样，并收集流出液。重复此过程 2-3 次以使 mRNA 更充分地结合到纤维素上；（3）用 2～3 倍柱容积的洗脱缓冲液洗脱 mRNA；（4）加入 1/10 容积的 3M NaAc (pH5.2) 于 mRNA 洗脱液中，混合后加入 2.5 倍体积的冰冷无水乙醇，混匀后-20 ℃ 沉淀 30 min
)，构象(例如超螺旋、开环或线性）以确保对迁移进行适当比较(了解更多: 结构和构象对样品迁移性的影响） 片段的数量和适当的分离形式，用于大小的估计 预期用途，如分子量标准是设计用于定性分析还是精确的定量测定 不同类型凝胶适用的分子量标准(例如，部分预制凝胶推荐设计特定分子量标准以获得最佳运行结果) 上样染料的性质，避免目的条带模糊(图 1) 上样缓冲液与使用凝胶的兼容性(例如，缓冲液的盐浓度会影响样品的迁移) 图 1. DNA 分子量标准差异。 分子量标准 #2 由色谱纯化的 DNA 片段组成，存在
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