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室温
12个月
Fish tissue DNA Extraction Kit
868
北京百奥莱博科技有限公司
50次|100次
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销售鱼DNA提取试剂盒厂家直销,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:鱼DNA提取试剂盒厂家直销
编号:ALH181
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
规格:50次|100次
本试剂盒采用独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶,然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜, 再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除, 最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。本试剂盒适用于快速提取各种鱼类、虾类、扇贝等组织基因组DNA。
试剂盒组份(100次):
裂解液SL————————————20ml
结合液CB————————————20ml
抑制物去除液IR—————————50ml
漂洗液WB————————————25ml
洗脱缓冲液EB——————————15ml
蛋白酶K————————————2×20mg
吸附柱AC————————————100个
收集管(2ml)——————————100个
注意事项:
洗脱液EB 不含有螯合剂EDTA,不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱,但应该确保批pH 大于7.5, pH 过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA 应该保存在-20℃。DNA 如果需要长期保存,可以用TE 缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl, 1mMEDTA,pH 8.0),但是EDTA 可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。
操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)
提示:第一次使用前请先在漂洗液WB 中加入指定量无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
1. 切取不多于30mg 的组织材料,放入装有180μl 组织裂解液SL 的1.5ml 离心管中,涡旋振荡15 秒。
根据提取的组织不同,起始量也稍有不同,腮的细胞量较大,一般建议提取量不超过20mg。如果裂解困难,可先用液氮研磨。
2. 加入20μl 的蛋白酶K 溶液(20mg/ml),立刻涡旋振荡充分混匀。将裂解物放置在55℃水浴1-3 小时或者直到组织消化完全。
不同组织裂解时间不同,通常需0.5–2小时即可完成。扇贝组织0.5小时基本可裂解完全,虾和鱼类组织1小时。每小时振荡混合样品2-3次,每次振荡混匀15秒。
可选做步骤: 如果RNA 残留较多,需要去除RNA,可在完成步骤2 后加20μlRNase A(25mg/ml)溶液,振荡混匀,室温放置5-10 分钟。
3. 加入200μl 结合液CB,立刻涡旋振荡充分混匀,70℃放置10分钟。
4. 冷却后加100μl 异丙醇,充分颠倒或涡旋振荡充分混匀,此时可能出现絮状沉淀。
5. 将上一步混合物和可能的沉淀都加入一个吸附柱AC 中,(吸附柱放入收集管中)13000rpm 离心60 秒,倒掉收集管中的废液。
如果有不溶组织物可能堵住枪头,可将枪头在吸水纸上轻蹭去除不溶物;如果吸上来的混合物少则可以将枪头和不溶物一起弃去,该做法是为了去除不溶物,以免堵塞离心柱。
上述步骤中立刻涡旋或者吹打充分混匀非常重要,混匀不充分严重降低产量,必要时如样品粘稠不易混匀时可以涡旋振荡15秒混匀。
6. 加入500μl 抑制物去除液IR,12000rpm 离心30 秒,弃废液。
7. 加入700μl 漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),12000rpm 离心30秒,弃掉废液。
8. 加入500μl 漂洗液WB,12000rpm 离心30 秒,弃掉废液。
9. 将吸附柱AC 放回空收集管中,13,000rpm 离心2 分钟,尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
10. 取出吸附柱AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加100μl 洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中预热效果更好),室温放置3-5 分钟,12000rpm 离心1 分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,室温放置2 分钟,12000rpm 离心1 分钟。
洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果需要DNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积, 但是最小体积不应少于50μl,体积过小降低DNA洗脱效率,减少DNA产量。
11. DNA可以存放在2-8℃,如果要长时间存放,可以放置在-20℃。
储存条件:室温,有效期12个月。
本品别名:鱼类组织DNA提取试剂盒|虾DNA提取试剂盒|扇贝DNA提取试剂盒|鱼DNA提取试剂盒
关于鱼DNA提取试剂盒厂家直销的更详细说明,请致电我公司咨询,我们将以最饱满的热情为您提供解答,此外,我公司专业供应下列产品:
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鱼DNA提取试剂盒厂家直销关键词:扇贝DNA提取试剂盒,鱼类组织DNA提取试剂盒,虾DNA提取试剂盒,鱼DNA提取试剂盒
·细胞组织总RNA提取试剂
编号:ALH001
英文名称:Total RNA extraction reagent From Tissue or Cell
规格:50ml|100ml
本试剂是直接从细胞或组织中提取总RNA的试剂。它在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性。加入氯*(代"仿")后离心,样品分成水样层和有机层。RNA存在于水样层中。收集上面的的水样层后,RNA可以通过异丙醇沉淀来还原。在除去水样层后,样品中的DNA和蛋白也能相继以沉淀的方式还原。乙醇沉淀能析出中间层的DNA,在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白。共纯化DNA对于样品间标准化RNA的产量十分有用。
无论是人、动物、植物还是细菌组织,该方法对少量的组织(50-100mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≥1g)和细胞(>107)均有较好的分离效果。本试剂操作上的简单性允许同时处理多个的样品。所有的操作可以在一小时内完成。本试剂抽提的总RNA能够避免DNA和蛋白的污染。故而能够作RNA印迹分析、斑点杂交、poly(A)+选择、体外翻译、RNA酶保护分析和分子克隆。如果是用于PCR,当两条引物位于单一外显子内时,建议用扩增级的DNase I来处理抽提的总RNA。
本试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。例如,从大鼠肝脏抽提的RNA琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色,可见许多介于7 kb和15 kb之间不连续的高分子量条带(mRNA和hnRNA成分),两条优势核糖体~5 kb (28S)和~2 kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3 kb之间 (tRNA, 5S)。当抽提的RNA用TE稀释时其A260/A280比值≥1.8。
储存条件:室温,有效期12个月。
注意事项:
1. 当本试剂用量少于2ml时建议使用清洁的一次性的聚丙材质试管。
2. 当本试剂用量较大时,可以使用玻璃试管(Corex)或聚丙材质试管,事先检验以确保该试管可以耐受加入本试剂和氯*(代"仿")后12,000×g的离心力。不可使用有裂缝或者破损的试管。
3. 离心前小心平衡试管。
4. 离心前玻璃管口必须盖上铝箔并用石蜡膜封口,聚丙烯管必须盖紧。
5. 从少量的组织(1~10mg)或细胞(102~104)中分离RNA 样品:往组织或细胞中加入800μl 本试剂。待样品裂解后,加入氯*(代"仿")并进行步骤2 中的抽提操作。在用异丙醇沉淀RNA 之前,加入5~10μg 无RNA 酶的glycogen 作为水样层的载体。为降低其黏度在加入氯*(代"仿")前用26 号注射器抽吸两次以切断基因组DNA。Glycogen 会留在水样层中并和RNA 共析出。在浓缩到4mg/ml 之前它不会抑制逆转录反应第一链的合成也不会抑制PCR。
6. 在匀化后和加入氯*(代"仿")之前,样品可以在–60~–70℃ 保存至少一个月。RNA 沉淀(步骤4,RNA 漂洗)溶于75%的乙醇在2~8℃ 至少可以保存一周,在–5~–20℃ 下至少可保存一年。
7. 台式离心机最大能达到2,600×g 的离心力,如果将离心时间延长到30~60 分钟可以满足步骤2 和步骤3 中的操作。
鱼DNA提取试剂盒厂家直销关键词:扇贝DNA提取试剂盒,鱼类组织DNA提取试剂盒,虾DNA提取试剂盒,鱼DNA提取试剂盒
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