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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
1年
- 英文名:
First strand thermostable reverse transcriptase PCR Kit
- 库存:
649
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 规格:
20μl×25次|20μl×50次
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销售耐热第一链反转录PCR试剂盒厂家,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:耐热第一链反转录PCR试剂盒厂家
编号:ALH268
规格:20μl×25次|20μl×50次
英文名:First strand thermostable reverse transcriptase PCR Kit
品牌:百奥莱博
本试剂盒以RNA为模板,用耐热反转录酶/RNase抑制剂混合物、2×RT Reaction Mix高效合成第一链cDNA,操作简单。制品使用通过基因重组技术克隆表达的点突变型RNase H活性缺失的M-MuLV反转录酶。 同时经过多点突变,提高了反转录温度耐受性,可以在45-55℃进行反转录。野生型的M-MuLV 包含的RNase H活性能够催化降解DNA/RNA杂合体中的RNA,因此在cDNA第一条链的合成反应中可能会降解RNA/DNA杂合体中的模板RNA。本酶M-MuLV(RNase Hˉ)的RNase H活性缺失,与M-MuLV 相比,具有更强的延伸能力和稳定性,可用于较长的cDNA合成以及高比例的全长cDNA文库的构建等。同时更高的反转录温度大大的提高了GC含量高,二级结构丰富的RNA模板的反转录效率。
试剂盒组分(50次):
耐热反转录酶/RNase抑制剂混合物-—————50μl
2×RT Reaction Mix-———————————500μl
Oligo(dT)18(0.5 μg/μl)-————————50μl
Random primer (N6)-———————————50μl
RNase free H2O-—————————————1ml
注意事项:
1. 避免RNase污染。
2. 为保证反转录成功建议使用高质量的RNA样品。
3. 如果RNA模板GC含量丰富或者有复杂二级结构,可以先只加RNA模板、引物和RNase free H2O混匀,65℃变性5分钟,冰上冷却,短暂离心后加入其它成分继续下面的反转录步骤。
储存条件:-20℃,有效期1年。
本品别名:耐热第一链反转录PCR试剂盒|高效耐热反转录试剂盒|耐热RT-PCR试剂盒
我公司的耐热第一链反转录PCR试剂盒厂家,性价比高,货期短,送货上门,欢迎您来电咨询购买,另外,我公司还生产供应销售下列产品:
·核酸助沉剂
编号:ALH059
英文名称:Auxiliary precipitating nucleic acid reagent
规格:1ml|5ml
本品是一种分子生物学级Poly多聚物溶液,在乙醇沉淀时加入5-10μl 本品即可明显提高核酸沉淀的得率,更可使痕量DNA的回收率达到95~98%,同时可选择性去除短引物(<22bp)片段和dNTP,用于沉淀回收标记探针,去除未标记dNTP。与生物源性的核酸沉淀助剂如糖原和tRNA相比,本品本身绝无核酸污染也无DNA酶和RNA酶活性,同时不影响酶切、连接、转录、PCR、转化转染等,也不影响核酸电泳和DNA-蛋白相互作用。本品已成为最常用的核酸助沉剂。
产品特点:
1.明显提高DNA或RNA沉淀的得率。
2.痕量DNA和RNA(20pg)回收达95~98%。
3.不影响酶切、连接、转录、PCR等反应。
4.不影响电泳和DNA-蛋白相互作用。
使用方法:
1. 提高DNA或RNA沉淀回收效率的使用方法:
①在1ml RNA 或者DNA 溶液中加入4-8 μl 本品,颠倒混匀。
②按照标准的乙醇沉淀法来沉淀RNA 或者DNA,如加入3M PH5.2 醋酸钠溶液(沉淀RNA 时应该使用无RNA 酶处理的溶液)到终浓度0.3 摩尔(约1/10 体积),然后加入2 倍体积的无水乙醇,混匀后室温或者冰箱放置10-30 分钟,12000 转离心10 分钟,弃上清,70%乙醇漂洗一遍,去上清,晾干沉淀,将沉淀重新溶解于适量DEPC 处理水(RNA 沉淀)或者其它如TE 缓冲液中。
2. 提高DNA或RNA产率的使用方法:
每一毫升总RNA提取试剂或者DNA提取试剂加入4~8μl本品。
注意事项:
本品会增加RNA 或者DNA 的光密度值,因此测量光密度值的时候,为了消除本品影响,应该按照同样的实验过程做一个空白对照样品(使用同样的试剂和本品,但是不含有RNA 或者DNA 样品,将最后的本品沉淀溶解在和样品一样的溶解液中)。测量样品和空白对照在260和280nm 的光密度值。将样品的光密度值减去空白对照的光密度值,便可以得到实际的样品的光密度值。如果定量不需要很精确,也可以估测。
储存条件:室温,12个月
耐热第一链反转录PCR试剂盒厂家关键词:耐热RT-PCR试剂盒,高效耐热反转录试剂盒,耐热第一链反转录PCR试剂盒
·M13噬菌体单链DNA提取试剂盒
编号:ALH161
英文名称:M13 phage single strand genomic DNA rapid extraction kit
规格:50次|100次|200次
本试剂盒将适量M13丝状噬菌体或者相关噬粒(M13来源)感染的液体培养物离心,上清中的单链噬菌体DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,将盐、细胞代谢物,蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净噬菌体单链DNA从硅基质膜上洗脱。M13和其它的丝状噬菌体载体,在文库构建和为序列测序提供单链DNA和引人突变方面十分有用。
试剂盒组份(100次):
结合液MB——————————50 ml
漂洗液WB——————————25 ml
洗脱缓冲液EB————————20 ml
吸附柱AC——————————100个
收集管(2ml) ————————100个
产品特点:
1.不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
2.节省时间,简捷,单个样品操作一般可在10分钟内完成。
3.产量高,典型的产量800µl M13丝状噬菌体上清可以提取3µg噬菌体单链DNA。
4.多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.7~1.9。可以直接用来测序,一般典型可辨认读长达650bp。
注意事项:
1. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 开始实验前将需要的水浴先预热到50℃备用。
3. 结合液MB 含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
储存条件:室温,有效期12个月。
·大量全血基因组DNA提取试剂盒(10ml)
编号:ALH116
英文名称:Whole blood genomic DNA extraction kit
规格:16次×10ml|96次×10ml
本试剂盒适用于快速提取各种动物全血基因组DNA。根据全血特点采用几个快速步骤提取基因组DNA。首先红细胞裂解液裂解去除不含DNA的红细胞,细胞核裂解液裂解白细胞释放出基因组DNA,然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白,最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。
试剂盒组份(16次):
10×红细胞裂解液——————50ml
细胞核裂解液————————180 ml
蛋白沉淀液—————————55ml
DNA溶解液—————————15ml
产品特点:
1.从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方,裂解快速完全。
2.不需要使用有毒的苯酚等试剂。
3.快速,简捷,单个样品操作一般可在1小时内完成。
4.结果稳定,产量高(典型的产量10ml全血可提取出150-500µg),OD260/OD280典型的比值达1.7~1.9,长度可达50kb-150kb,可直接用于构建文库、PCR、Southern-blot和各种酶切反应。
注意事项
1. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到2500g,并配备容纳50ml心管转头的传统台式离心机。
2. 用户需自备异丙醇和70%乙醇。
3. 典型的产量10ml全血可提取出150-500μg基因组DNA(不同样品尤其疾病样品中中白细胞数量差异可能非常大,因此产量的个体差异也可能非常大)。
4. 本试剂盒为溶液型,可以很容易的按照比例扩大或者缩小每次处理的全血量(20μl-10ml),请联系我们索取其它处理量的操作手册。
5. 本试剂盒可运用于多种抗凝剂的全血,如EDTA、柠檬酸、肝素抗凝血。其中由于肝素抗凝血的白细胞沉淀团很难打散重悬,影响裂解效果,建议选用非肝素的
抗凝剂收集血液标本。
6. 为了最佳效果,最好使用新鲜血液标本或者4℃存放小于3天的标本,不要使用反复冻融超过3次的标本,否则会严重降低产量。
储存条件:室温,有效期18个月。
耐热第一链反转录PCR试剂盒厂家关键词:耐热RT-PCR试剂盒,高效耐热反转录试剂盒,耐热第一链反转录PCR试剂盒
·真菌基因组DNA提取试剂盒
编号:ALH167
英文名称:Rapid extraction kit for fungal genomic DNA
规格:50次|100次|200次
本试剂盒适用于快速提取真菌组织细胞基因组DNA。采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统,适合于从真菌组织细胞中快速简单地提取基因组DNA。可在30分钟内完成一个或多个100mg新鲜或20mg干燥的真菌样品DNA的纯化工作。提取过程不需要用到有毒的酚氯*(代"仿")等有机物抽提,也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀,并能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等杂质,纯化的DNA可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。
新鲜或干燥的真菌组织(细胞)磨碎后经裂解液裂解;蛋白质、多糖、细胞残片被沉淀去除;然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜, 再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 进一步将多糖,多酚和细胞代谢物,蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
试剂盒组份(100次):
RNaseA(10mg/ml)——————500μl
缓冲液AP1—————————50ml
缓冲液AP2—————————20ml
缓冲液AP3/E————————25ml
漂洗液WB —————————25ml
洗脱缓冲液EB ———————20ml
吸附柱AC —————————100个
收集管(2ml)————————100个
产品特点:
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
3.快速,简捷,单个样品操作一般可在1小时内完成。
4.数种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.7~1.9,可直接用于PCR,Southern-blot和各种酶切反应。
注意事项:
1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2. 不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
3. 快速,简捷,单个样品操作一般可在1 小时内完成。
4. 数种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度, OD260/OD280 典型的比值达1.7~1.9,可直接用于PCR,Southern-blot 和各种酶切反应。
储存条件:室温,有效期12个月。
我公司正在打折促销核酸扩增(PCR)全系列产品,恭候您的咨询选购耐热第一链反转录PCR试剂盒厂家。
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文献和实验产物的 DNA:RNA 杂交链变性后利用大肠杆菌 DNA 聚合酶Ⅰ Klenow 片段或反转录酶合成 cDNA 第二链,最后用对单链特异性的 S1 核酸酶消化该环,即可进一步克隆。但自身引导合成法较难控制反应,而且用 S1 核酸酶切割发夹结构时无一例外地将导致对应于 mRNA 5' 端序列出现缺失和重排,因而该方法目前很少使用。 2、置换合成法: 该方法利用第一链在反转录酶作用下产生的 cDNA:mRNA 杂交链不用碱变性,而是在 dNTP 存在下,利用 RNA 酶H在杂交链的 mRNA 链上造成切口
退火,并由DNA聚合酶催化引物延伸生成双链靶DNA, 最后扩增靶DNA。cDNA第二链的合成方法有以下几种: 1、自身引导法 合成的单链cDNA 3'端能够形成一短的发夹结构,这就为第二链的合成提供了现成的引物,当第一链合成反应产物的DNA:RNA杂交链变性后利用大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ Klenow片段或反转录酶合成cDNA第二链,最后用对单链特异性的S1核酸酶消化该环,即可进一步克隆。但自身引导合成法较难控制反应,而且用S1核酸酶切割发夹结构时无一例外地将导致对应于mRNA 5'端序列出现缺失和重排
SMARTTM 5‘-RACE的原理是先是利用mRNA的3‘末端的poly(A)尾巴作为一个引物结合位点,以Oligo(dT)30 MN作为锁定引物在反转录酶MMLV作用下,反转录合成标准第一链cDNA。利用该反转录酶具有的末端转移酶活性,在反转录达到第一链的5‘末端时自动加上3一5个(dC)残基,退火后(dC)残基与含有SMART寡核苷酸序列Oliogo(dG)通用接头引物配对后,转换为以SMART序列为模板继续延伸而连上通用接头(figure 2 )。然后用一个含有部分
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