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文献和实验aspirin713 各位好,拜托大家给点建议 我最近在做FCM,主要是测药物对黑色素肿瘤细胞的生长周期的影响,用的方法是FCM PI染色的方法。 但是70%的乙醇固定之后,离心后可以看到有大量的细胞贴壁,把上清吸出去以后,可以看到沉淀留在底部,但是加入了PBS吹打均匀以后再离心。不管怎么样延长时间,或加大转速,就是没有细胞离到壁上,请问大家,这是怎么回事。应该如何避免上面这样的问题出现呢?! 干细胞之星 固定
细胞周期(cell cycle)是指连续分裂细胞从一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂结束所经历的整个过程。细胞周期的研究对于深入了解生物的生长发育和控制肿瘤生长等有重要意义。如:在癌症治疗中,G0 期细胞对化疗不敏感,癌细胞难以被有效杀灭,往往成为日后癌症复发的根源。通过诱导 G0 期癌细胞进入细胞周期,提高化疗敏感性,可以有效杀伤癌细胞。 细胞周期的检测,主要是利用细胞内 DNA 能够和某些特定荧光染料(如碘化丙啶,PI)结合的特性。由于细胞各个时期的DNA 含量不同,其结合的荧
1、构建了载体,表达目的基因+GFP的融合蛋白(用的是PEGFP-N1),转染48小时后,处理细胞,百分之七十乙醇固定过夜,PI单染上流式测周期!由于,转染效率太低,通过了流式设门分别圈出了阴性和阳性细胞,再分别测其CELL周期变化! 有几个问题,想和大家一起讨论一下: (1)在一些SCI文献中报道,通过MTT法,此目的基因表达,促进一些细胞(非我用的细胞系,我用的转染CELL,之前没有报道!)增殖,但是,从周期图来看,转进去的阳性CELL,反而停在G0
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