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联硕生物
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低温
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1瓶
Thermo Scientific Maxima H Minus cDNA 合成预混液以便利的单管预混液形式提供所有 cDNA 合成反应组分。其经过优化,可实现高效的 cDNA 合成,适用于两步法定量 RT-PCR (RT-qPCR) 应用。
特点包括:
•单管预混液有助于减少移液步骤并提高 RT-qPCR 结果的一致性
•可在较宽的 RNA 起始量和基因靶标范围内提高 RT 效率
•高热稳定性,以允许在 50 至 65°C 的温度范围内进行 RT 反应
预混液含有 Maxima H Minus 反转录酶 (RT) 和 RiboLock RNase 抑制剂。Maxima H Minus RT 是一种通过体外进化从 M-MuLV RT 衍生而来的高级酶。该酶具有以下特点:高热稳定性、耐用性、持续合成能力,cDNA 合成速率有所提高,无 RNase H 活性。重组 RiboLock RNase 抑制剂可在高达 55°C 下有效防止 RNases A、B 和 C 引起的 RNA 模板降解。预混液还含有反应缓冲液、dNTP、寡聚 (dT)18 和随机六聚体引物。还提供了一单管无 RT 对照品混合物。
Maxima H Minus cDNA 合成预混液能够在高温 (50–65°C) 下进行可重现 cDNA 合成。合成反应通常在 15–30 分钟内完成。
有关反应组分的其他信息
•无 RT 对照品混合物包含 Maxima H Minus cDNA 合成预混液中除 RT 外的所有组分。无 RT 对照品反应中存在 PCR 产物表明反应被 DNA 污染。为进一步提高基因组 DNA 消除效率,强烈推荐将模板 RNA 与 dsDNase(货号 EN0771)共同孵育。
• 无核酸酶水用于样品 DNA 的反应构建和稀释。经适当的质量检测确认,不含脱氧核糖核酸外切酶、核糖核酸酶以及磷酸酶。
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文献和实验的同聚核苷酸锚定序列。利用第二个巢式GSP和一个与同聚核苷酸尾巴可以退火的锚定引物来扩增cDNA的5'末端。用SUPERSCRIPTTM II RT从mRNA复制成cDNA用RNase H和RNase T1降解RNA用GLASSMAXò Spin Cartridge纯化cDNA用dCTP和TdT给纯化的cDNA加尾用精简的锚定引物和巢式GSP2 PCR扩增dC加尾的cDNA 用AUAP和巢式GSP重新扩增初步PCR产物最初的5'RACE系统是按照这个方法进行的,它首先利用SUPERSCRIPT™
Promega公司的RibocloneR M-MLV(H- ) cDNA合成系统采用M-MLV反转录酶的RNase H缺失突变株取代AMV反转录酶,使合成的cDNA更长。该系统的第一链合成使用M-MLV反转录酶,cDNA第二链合成采用置换合成法,采用RNaseH和DNA聚合酶Ⅰ进行置换合成,最后用T4 DNA聚合酶切去单链末端,方法简便易行。该系统试剂包括:20μg 特异性引物 200μl M-MLV第一链缓冲液(5×),配方如下: 250mmol/L Tris·Cl pH8.3(37℃时
Invitrogen 性能卓越的系统整合了可以利用的最好的RT技术,包括SuperScript™ III RT和最新推出的Thermo-X™ RT。SuperScript™ III RT是M-MLV RT基因工程升级版本,减少了RNaseH活性,提供更高的热稳定性(1-3)。这种酶可以在高达55℃的情况下合成cDNA,比以前使用的反转录酶提供更高的特异性,更高的cDNA产量以及更多的全长产物。Thermo-X™ RT克隆自一种嗜热真细菌,提供高达70℃的热稳定
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