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- KALANG
- 中国大陆
- KL003
- 2025年07月12日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
2～8℃
- 保质期：
长期
- 库存：
大量
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
50次
EASYspin酵母RNA快速提取试剂盒
规格：50次编号：KL003
适用范围：
适用于从酵母中快速提取无基因组DNA污染的高纯度的酵母RNA。
本试剂盒按照指示储存12个月不影响使用效果。
储存事项：
1.所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。
2.不合适的储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。
3.为避免降低活性，方便运输，提供Lyticase(2500U)为冻干粉状，收到后，可短暂离心后，加入0.25ml灭菌水溶解配制成10U/μl，因为反复冻融可能会降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量分装冻存，－20℃保存，避免反复冻融。
4.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：
酵母细胞经lyticase处理去除细胞壁后，独特的裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，然后用乙醇调节结合条件后，RNA选择性吸附于离心柱内玻璃纤维膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的RNase free H20将纯净RNA从玻璃纤维膜上洗脱。
产品特点：
1.离心吸附柱内玻璃纤维膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.不需要使用有毒的苯酚,等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
3.快速，简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。
4.基因组DNA清除柱可以有效的消除基因组DNA的污染。
5.多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.9～2.0，基本无DNA残留,可用于RT-PCR，Northern-blot和各种实验。
注意事项
1.第一次使用前请先在漂洗液RW瓶中加入指定量乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
2.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到12，000 rpm的传统台式离心机。
3.需要自备乙醇，β-巯基乙醇，水浴锅。
4.裂解液RLTplus2 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
5.RNA 纯度及浓度检测:
完整性：RNA 可用普通琼脂糖凝胶电泳 (电泳条件：胶浓度1.2%；0.5×TBE电泳缓冲液；150v，15 分钟)检测完整性。由于细胞中70%-80%的RNA 为rRNA，电泳后UV 下应能看到非常明显的rRNA 条带。动物rRNA 大小分别约为5 kb 和2kb，分别相当于28S 和18S rRNA。动物RNA 样品中最大rRNA 亮度应为次大rRNA亮度的1.5-2.0 倍，否则表示RNA 样品的降解。出现弥散片状或条带消失表明样品严重降解。
纯 度：OD260/OD280 比值是衡量蛋白质污染程度的指标。高质量的RNA，OD260/OD280 读数（10mMTris, pH7.5）在1.8-2.1 之间。OD260/OD280 读数受测定所用溶液的pH 值影响。同一个RNA 样品，假定在10mM Tris，pH7.5 溶液中测出的OD260/OD280 读数1.8-2.1 之间，在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9 之间，但这并不表示RNA 不纯。
浓 度：取一定量的 RNA 提取物，用RNase-free 水稀释n 倍，用RNase-free水将分光光度计调零，取稀释液进行OD260, OD280 测定，按照以下公式进行RNA浓度的计算：终浓度（ng/μl）= (OD260)×(稀释倍数n)×40
6.如果破壁效果不好导致RNA产量低，可以加大lyicase用量来提高酶工作浓度，还可以延长消化时间来提高效果，不适合Lyticase消化的酵母可选用Zymolase或者其它方法如玻璃珠涡旋，反复冻融等。
操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）
提示：
第一次使用前请先在漂洗液RW瓶中加入指定量无水乙醇!
操作前在裂解液RLTplus2中加入β-巯基乙醇至终浓度1%，如1 ml RLTplus2 中加入10μl β-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的RLTplus2 4℃可放置一个月。
吸取使用量的缓冲液SE加入0.1%β-巯基乙醇，回复到室温备用。
1.小量酵母培养细胞
a.收集1ml （约107细胞）处于对数生长期酵母培养物到1.5ml离心管， 9,000 rpm离心30秒，尽可能吸弃上清。
b.加入100μl缓冲液SE（使用前先吸取使用量放入1.5ml离心管，回复到室温备用）中，轻柔吹打充分重悬细胞；根据酵母量加入约50U lyticase，充分颠倒混匀，37℃温育10－30分钟消化细胞壁，中间可颠倒数次帮助消化。
c.加入350μl裂解液RLTplus2（确认已经加入β-巯基乙醇至终浓度1%），剧烈涡旋吹打，充分裂解混匀。（如果有明显不溶物，最高速离心2分钟，取全部上清）
d.将所有裂解物上清转移至一个基因组DNA清除柱中（清除柱放入收集管中），12,000rpm离心30~60秒，收集滤液。在滤液中加入250μl 96－100％乙醇，立即吹打混匀，不要离心。
e.接操作步骤项下3。
2.中量酵母培养细胞
a.收集2－3ml （约3x107细胞）处于对数生长期酵母培养物到1.5ml离心管（超过1.5ml可分两次在同一个离心管内进行收集细胞），12,000rpm离心15秒，尽可能吸弃上清。
b.加入600μl缓冲液SE（使用前先吸取使用量放入1.5ml离心管，回复到室温备用）中，轻柔吹打充分重悬细胞；根据酵母量加入约100-150U lyticase，充分颠倒混匀，37℃温育10－30分钟消化细胞壁，中间可颠倒数次帮助消化。
c.12,000 rpm离心1分钟，尽可能吸弃上清。
d.加入350μl裂解液RLTplus2（确认已经加入β-巯基乙醇至终浓度1%），剧烈涡旋吹打，充分裂解混匀。（如果有明显不溶解物，最高速离心2分钟，取上清）
e.将所有裂解物上清转移至一个基因组DNA清除柱中（清除柱放入收集管中），12,000rpm离心30~60秒，收集滤液。在滤液中加入等体积70％乙醇（DEPC水配制，约350μl）立即吹打混匀，不要离心。
f.接操作步骤项下3。
3.将混合物加入一个吸附柱RA中，（吸附柱放入收集管中）12,000 rpm离心30-60秒，弃掉废液。
4.加700μl 去蛋白液RW1，室温放置30秒，12,000 rpm 离心30秒，弃掉废液。
如果DNA残留明显,可在加入RW1后室温放置5分钟再离心。
5.加入700μl漂洗液RW（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000 rpm 离心30秒，弃掉废液。加入500μl漂洗液RW，重复一遍。
6.将吸附柱RA放回空收集管中，12,000 rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
7.取出吸附柱RA，放入一个RNase free离心管中，根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加30-50μl RNase free water（事先在 70-80℃水浴中加热）， 室温放置1分钟，12,000 rpm 离心1分钟。
8.如果预期RNA产量>30μg,加30-50μl RNase free water重复步骤7, 合并两次洗脱液,或者使用第一次的洗脱液加回到吸附柱重复步骤一遍(如果需要RNA浓度高)。
洗脱两遍的RNA洗脱液浓度高,分两次洗脱合并洗脱液的RNA产量比前者高15–30%,但是浓度要低,用户根据需要选择。
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文献和实验♦ 适用范围：适用于快速提取植物组织细胞总RNA本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。♦ 储存事项：1. 所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。2. 不合适的储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。3. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。♦ 产品介绍：独特的裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭
一点，对操作技术的要求高一点，样品量太小也不适合。 总结：如果是新鲜血样品，首先推荐RN25 RNAblood 超纯全血总RNA快速提取试剂盒或者RN23 RNAliquid 超速全血（液体样本）总RNA提取试剂盒；如果你是冰冻血，别无选择，只有推荐RN23 RNAliquid 超速全血（液体样本）总RNA提取试剂盒；需要处理，运输，保存血液样品后再提取也是推荐RN23 RNAliquid 超速全血（液体样本）总RNA提取试剂盒。 酵母样品RN10 EASYspin酵母RNA快速提取试剂盒，不用
/RNA同时加到吸附柱上去。如何去除DNA是第一个难点。否则会残留大量DNA。两个技术难点的没有掌握导致了国内公司包括的第二种试剂盒失败。国外公司因为没有掌握第一难点，裂解液里面没有去除多糖多酚成分，所以包括Qiagen的RNeasy plant mini kit盒子也常常不能成功提取较复杂植物RNA样品如黑加仑、冬青等植物样品。 北京艾德莱生物的研发人员经过3年的不断研发改良，针对多糖多酚植物的特点，和这两种试剂盒失败的原因，开发出了世界领先水平的RN09 EASYspin植物RNA快速提取试剂盒
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