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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
大量
- 供应商:
上海晶抗生物工程有限公司
- 检测范围:
科研试剂
- 检测方法:
酶联免疫检测法
- 应用:
仅用于科研领域
- 适应物种:
Huamn等
- 规格:
48T/96T
大鼠碱性磷酸酶(AKP)ELISA检测试剂盒质控血清的制备:
1、收集新鲜的无溶血、无黄疸、无细菌污染的阳性血清。
2、56℃加热10小时来活。
3、离心或过滤除去沉淀。
4、用10%的小牛血清或正常人血清(PBS缓冲液)将收集的血清稀释至所需的浓度。
5、抽滤除菌,按一次使用的量分装小安瓿,封口,20℃保存备用,不可反复冻融,被检物要求检出的水平常被认为是质控血清应选择的水平。
6、标定含量,20-30次测定结果删除>±2SD数据的均值作为靶值,并与已知定值血清对比测定。
大鼠碱性磷酸酶(AKP)ELISA检测试剂盒操作过程中的几个必知项目有:
1)温浴时,要用不干胶或胶带纸封酶标板,避免水分的蒸发。
2)将液体加到酶标孔中时,避免枪头和孔内液体接触,可使枪头上的液滴和孔壁接触,液滴会天然流下去。
3)洗板时,每次洗液参与后,应静置1分钟,使清洗更加彻底,没有洗板机时,倒去液体后,要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。
4)洗液不行时,可用蒸馏水自行制作PH7.4,0.02M的磷酸缓冲液,参与0.1%的吐温6作为洗液,参与1/1000的叠氮钠后可长期保留。
5)ELISA试剂盒实验中,液体全部加完后,可将酶标板在桌子上平行悄然晃动30秒,混匀液体,也可以用酶标仪的晃动功用。
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文献和实验; V 0 -原溶液的体积; S 1 -原溶液中有机溶剂的浓度 S 2 -要求达到的有机溶剂浓度; 100-指加入的有机溶剂浓度为100%。如所加入的有机溶剂的浓度为95%,上式(100一S2)项应改为(95一S2)。 在大规模制备沉淀时,若溶剂浓度的要求不太严格时,可用简单的交叉方法求出。 本实验采用有机溶剂沉淀法从肝匀桨中分离纯化碱性磷酸酶(简称AKP)。先用低浓度醋酸钠(低渗破模作用)制备肝匀浆。醋酸镁则有保护
主要方法。林一贝(Lineweaver—Burk)氏根据米—曼氏方程式又推导如下方程式: 以不同的底物浓度1/[S]为横坐标1/v为纵坐标,按直线回归方程计算,作图,并向纵轴方向延长,此线在横轴上截距为1/Km的负值。 本实验以碱性磷酸酶为例,选择不同浓度的磷酸苯二钠为其底物,磷酸苯二钠被AKP水解后,生成酚和磷酸,酚在碱性溶液中与4—氨基安替比林作用,经铁氰化钾氧化生成红色醌的衍生物,根据红色的深浅可测出酶活力高低,其反应式如下
碱性磷酸酶检测法( AKP 法) 1. 按 MTT 法用细胞因子处理靶细胞适当时间,用 PBS 洗去死亡细胞,洗两次。 2. 向 96 孔细胞培养板各孔中加 0.2ml 新鲜配制的底物液( 0.2mol/L 硼酸, 1mmol/L MgCl2 , 1.2mmol/L 甲伞基磷酸)。在 37 ℃ 5 % CO2 的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养 3 小时。 3. 在荧光计数仪上测定荧光的量。根据测定已知
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