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文献和实验克隆PCR产物并进行DNA测序。 二．材料与方法 1 材料 肝脏RNA 2 仪器、用具 PCR仪、0.2mlPCR管、移液器 3 试剂 (1) RNase Free H 2 O；10×RNA PCR Bμffer；MgCl2(5mM)；RNase Inhibitor(40μ/μl)；Oligo dt-3sites Adaptor Primer(2.5μM)；AMV Reverse
现配）、TEMED、甲酰胺上样缓冲液、固定液、银染液、显色液。2、微量加样器、PCR自动热循环仪、聚丙烯酰胺凝胶电泳装置。实验步骤一、PCR反应20 ml反应体系成分如下：模板DNA（100 ng/ml） 1 ml 10×PCR反应缓冲液 2 ml Taq DNA聚合酶（5 U/ml） 0.2 ml 4×dNTPs（2.5 mmol/L） 1 ml MTHFR上下游引物 各 1 ml ddH2O 加至终体积
产物的最适浓度是6-10mM。 4.脱氧核苷三磷酸 使用四种脱氧核苷三磷酸(dNTP)中每一种的高浓度对于有效合成cDNA是特别重要的。如果其中只有一种的浓度下降到10-50微摩尔以下，全长转录物的产量将明显下降。常用的dNTP的浓度为200-250微摩尔。 材料与方法 1 材料 RNA样品 2 仪器、用具 PCR仪、电泳仪等、0.2mlPCR管(1个)、移液器、碎冰 3 试剂 RNase Free dH
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