- ¥1784
- Clontech
- 进口
- 630496
- 2025年07月16日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
低温
- 库存：
现货
- 供应商：
上海善然生物科技有限公司
- 规格：
100 Rxns
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| ■ 制品说明 | |||||||
| 酵母单杂交系统—Matchmaker Gold | |||||||
| Clontech Matchmaker Gold酵母单杂交（Y1H）文库筛选系统为鉴定蛋白质-DNA相互作用提供了简便高效的方法。所有的Matchmaker Gold系统均采用筛选强度较高的Aureobasidin A（AbAr）抗生素报告基因。这种新型的报告子可以高效杀死非抗性克隆，从而大大降低了背景克隆的生长。 | |||||||
| Matchmaker Gold酵母单杂交系统 | |||||||
| 在Matchmaker Gold酵母单杂交系统中，目标/bait DNA序列重复串联后克隆到pAbAi报告载体上。用同源重组的方法将携带bait的pAbAi载体整合到Y1HGold酵母基因组中，用于后续文库的筛选。 | |||||||
| 一步法构建和筛选文库 | |||||||
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| 在文库中，可能与bait DNA序列相互作用的prey蛋白的cDNA与GAL4 AD融合表达，文库通过SMART技术与同源重组技术直接构建于Y1HGold[Bait-AbAi]报告菌株中。当prey蛋白与bait序列结合时，相应的GAL4 AD会激活AbAr的表达，酵母可在添加了AbA的培养基上生长。在文库筛选中，编码prey蛋白的质粒可以较容易地从酵母克隆中分离出来进行后续的验证分析。 | |||||||
| 快速获得结果！ | |||||||
| Matchmaker Gold 单杂交文库筛选过程直接、快速、简单！ 第一步：将1-3个目标DNA序列（bait）重复串联后克隆到pAbAi中。 第二步：将线性化的pBait-AbAi载体整合到Y1HGold酵母基因组中，获得携带bait的酵母菌株， 并在SD/-Ura培养基上筛选。 第三步：利用Insert Check PCR Mix 1，通过PCR对整合到酵母基因组的bait DNA序列进行验证分析。 第四步：利用SMART技术合成与线性化的pGADT7-Rec末端具有相同序列的Prey蛋白的cDNA。 第五步：将合成的cDNA和线性化的pGADT7-Rec共转化到上述Y1HGold bait菌株中构建文库，同 时利用AbA选择培养基进行筛选。 第六步：收集获得的阳性克隆，并用Matchmaker Insert Check PCR Mix 2对文库中的插入片段进行分析。 |
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| 菌落PCR分析 | |||||||
| 在Y1H及Y2H筛选中，菌落PCR是分析bait菌株并对阳性克隆进行分类的简便、快速的方法。用Matchmaker Insert Check PCR Mix 1可以验证整合到Y1H酵母基因组的bait DNA序列，用Matchmaker Insert Check PCR Mix 2可以快速分析单杂及双杂筛选中阳性克隆子的插入片段。 | |||||||
| 酵母单杂交培养基 | |||||||
| 我们的酵母单杂交培养基套装里包含有配套于Clontech Matchmaker Gold One-Hybrid操作中所用到的的培养基。 | |||||||
| ■ 制品特点 | |||||||
| 1. 表现较好的酵母单杂交系统 2. AbA抗性筛选大大消除背景克隆 3. 在酵母体内直接完成文库构建和筛选 |
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文献和实验酵母单杂交技术 1．酵母单杂交的基本原理 酵母 单杂交技术是1993年由酵母双杂交技术发展而来的，其基本原理为：真核生物基因的转录起始需转录因子参与，转录因子通常由一个DNA特异性结合功能域和一个或多个其他调控蛋白相互作用的激活功能域组成，即DNA结合结构域(DNA―bindingdomain，BD)和转录激活结构域(activationdomain，AD)。用于酵母单杂交系统的酵母GAL4蛋白是一种典型的转录因子，GAL4的DNA结合结构
基因表达是分子生物学领域的重要内容之一，人们利用基因表达技术制备各种目的基因的重组蛋白质，在分析基因的表达与调控、基因的结构与功能、基因治疗以及生物制药等领域均取得了令人振奋的成果。其中，酵母表达系统拥有转录后加工修饰功能，操作简便，成本低廉，适合于稳定表达有功能的外源蛋白质，而且可大规模发酵，是最理想的重组真核蛋白质生产制备用工具。1、酵母表达系统的特点 酵母是一种单细胞低等真核生物，培养条件普通，生长繁殖速度迅速，能够耐受较高的流体静压，用于表达基因工程产品时，可以大规模生产，有效降低
蛋白相互作用的激活功能域组成，即DNA结合结构域(DNA—bindingdomain，BD)和转录激活结构域(activationdomain，AD)。用于酵母单杂交系统的酵母GAL4蛋白是一种典型的转录因子，GAL4的DNA结合结构域靠近羧基端，含有几个锌指结构，可激活酵母半乳糖苷酶的上游激活位点(UAS)，而转录激活结构域可与RNA聚合酶或转录因子TFIID相互作用，提高RNA聚合酶的活性。在这一过程中，DNA结合结构域和转录激活结构域可完全独立地发挥作用。据此，我们可将GAL4的DNA结合结构域置换为文库
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