- ¥16058
- Clontech
- 进口
- 630490
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
低温
- 英文名：
Make Your Own "Mate & Plate™" Library System
- 库存：
大量
- 供应商：
上海善然生物科技有限公司
- 规格：
5 Rxns
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| ■ 制品说明 | |||||
| Mate & Plate的优点 | |||||
| 如果不使用Clontech的预制Mate & Plate Libraries，构建和筛选一个传统的酵母双杂交文库是非常繁冗的。而使用预制文库，只需将MATα型文库菌株和转入诱饵基因构建体的MATa型酵母菌株共同过夜孵育，然后将接合后的菌液涂板于合适的选择培养基上即可，操作简便。Clontech提供多种组织特异的、均一化的通用文库，适用于绝大多数文库筛选。 | |||||
| 需要自己的文库吗？您可以自己制作，简便而且快速。 | |||||
| 如果Mate & Plate Libraries中没有适合您需要的文库，您可使用Make Your Own Mate & Plate Library System自己制作文库。利用该系统，一周之内即可构建足够用于数百次酵母双杂交筛选实验的所需文库。文库构建是在Y187文库酵母菌株中通过酵母高效的同源重组机制直接完成的 (图1)，无需传统文库构建过程中的一些繁冗的操作 (比如文库克隆、扩增和大肠杆菌收集等)。 | |||||
| 经济有效的操作以及SMART技术 | |||||
| 该系统利用Clontech的SMART cDNA合成技术，使用任意组织来源的少至100ng的总RNA，即可构建cDNA文库。SMART技术利用了MMLV (Moloney murine leukemia virus) RT的末端转移酶活性和模板转换机制，合成的一链cDNA序列末端含有已知的通用引物结合位点。因此，SMART一链cDNA可以通过PCR进行扩增，然后与具有末端同源序列的Matchmaker Gold 猎物载体pGADT7-Rec进行重组。基于以上特征，使用纳克级的RNA (例如来源于显微解剖组织、激光捕获细胞或者活检样品) 即可合成cDNA，共转化这些cDNA和pGADT7-Rec到酵母菌株Y187中，即可直接构建文库。 | |||||
| ■ 制品特点 | |||||
| 1. 利用SMART™技术在酵母中直接构建文库 2. 无需繁琐的克隆或文库扩增 3. 足够用于数百次的双杂交筛选 |
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文献和实验,产生约15000种不同的mRNA分子.可见,由mRNA出发的cDNA克隆,其复杂程度要比直接从基因组克隆简单得多。 cDNA文库在研究具体某类特定细胞中基因组的表达状态及表达基因的功能鉴定方便具有特殊的优势，从而使它在个体发育、细胞分化、细胞周期调控、细胞衰老和死亡调控等生命现象的研究中具有更为广泛的应用价值，是研究工作中最常使用到的基因文库。 原理 经典cDNA文库构建的基本原理：用Oligo（dT）作逆转录引物，或者用随机引物，给所合成的cDNA 加上适当的连接
1. Identify appropriate celltype over-expressing corresponding gene. 2. Find out if transcription can be stimulated further eg by induction (note: the higher the mRNA level of the gene in question the easier it will be picked
I. NEBULIZATION of DNA 1. 0.5 - 5 ug DNA in TE (10mM/1mM), 25% glycerol, final volume 500 ul 2. nebulize for 90-100 sec at 5-10 psi (for a medium size of about 1.5kbp) 3. Precipitate with EtOH/Ammonium Acetate
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