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信裕生物
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1 mL
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文献和实验于质粒的纯化。 recA1 减少克隆DNA的非特异性重组。 DE3 编码T7 RNA聚合酶,用于诱导T7-启动的表达系统的表达。 DeoR 可以高效吸收大片段DNA,有利于文库的构建。 Tn10 含 有四环素抗性的转座子。 OmpT 表明大肠杆菌缺乏外膜蛋白酶。缺乏外膜蛋白酶的菌株可以降低表达的外源蛋白在细菌中被降解的程度,有利于获得完整的重组蛋白。 PLys 含编码T7溶菌酶的质粒;通过抑制T7 RNA聚合酶基础表达水平来降低T7启动的表达体系的基础表达水平。 ArgF 由于突变
基因的功能。 启动子、终止子和核糖体结合位点 启动子: 启动子的强弱是对表达量有决定性影响的因素之一。从转录模式上看有组成型表达和诱导调控型表达。lac和Tac,PL和PR,T7是最常用的启动子 组成型表达 :表达载体的启动子为组成型启动子,也就是一直努力不停表达目的蛋白的启动子,如pMAL系统。持续性表达通常表达量比较高,成本低,但是不适合表达一些对宿主细菌生长有害的蛋白。因为过量或者有害的表达产物会影响细菌的生长,反过来影响表达量的积累。 诱导调控型表达 :表达载体采用诱导
蛋白的lacIq突变菌株常被选为Lac/Tac/trc表达系统的表达菌株。现在的Lac/Tac/trc载体上通常还带有lacIq 基因,以表达更多lacI阻遏蛋白实现严谨的诱导调控。IPTG广泛用于诱导表达系统,但是IPTG有一定毒性,有人认为在制备医疗目的的重组蛋白并不合适,因而也有用乳糖代替IPTG作为诱导物的研究。另外一种研究方向是用lacI的温度敏感突变体,30度下抑制转录,42度开发。热诱导不用添加外来的诱导物,成本低,但是由于发酵过程中加热升温比较慢而影响诱导效果,而且热诱导本身会导致大肠杆菌
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