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- 2025年07月09日
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负20度
- 英文名：
Recombinant N-Acetyltransferase 2 (NAT2)
- 库存：
大量
- 供应商：
柯雷生物
Residues: Asp20~Val280
Tags: Two N-terminal Tags, His-tag and GST-tag
Accession: P50298
Host: E. coli
Subcellular Location: Cytoplasm.
Purity: >95%
Endotoxin Level: <1.0EU per 1μg (determined by the LAL method).
Formulation: Supplied as lyophilized form in PBS, pH7.4, containing 5% trehalose, 0.01% sarcosyl. Predicted isoelectric point: 5.1 Predicted Molecular Mass: 60.3kDa Applications: SDS-PAGE; WB; ELISA; IP. (May be suitable for use in other assays to be determined by the end user.)
[ USAGE ]
Reconstitute in sterile PBS, pH7.2-pH7.4.
[ STORAGE AND STABILITY ]
Storage: Avoid repeated freeze/thaw cycles. Store at 2-8oC for one month. Aliquot and store at -80oC for 12 months. Stability Test: The thermal stability is described by the loss rate of the target protein. The loss rate was determined by accelerated thermal degradation test, that is, incubate the protein at 37oC for 48h, and no obvious degradation and precipitation were observed. (Referring from China Biological Products Standard, which was calculated by the Arrhenius equation.) The loss of this protein is less than 5% within the expiration date under appropriate storage condition.
[ SEQUENCES ]
The sequence of the target protein is listed below. D LEELTEILQH QIRAIPFENL NIHCGESMEL NLEVIFDQVV RKKRGGWCLQ VNHLLYWALT KMGFEATMLG GYVFNTPANK YSSGMIHLLV QVTLSGKDYI VDAGFGRSYQ MWEPLELTSG KDQPQVPAIF RLTEENGTWY LDQIRREQYV PNQEFVNSDL LEKNKYRKIY SFTLEPRTIE DFESINTYLQ TSPASLFTSK SFCSLQTLEG VHCLVGSTLT YRRFSYKDNI DLVEFKSLTE EEIEDVLKTI FGVSLERKLV
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文献和实验1 介绍用于生产治疗性重组蛋白的哺乳动物补料批次细胞培养物的性能和产量取决于细胞对变化的培养环境的反应。广泛报道的一种提高哺乳动物细胞生产力的策略是基于在高渗条件下培养细胞的。例如，通过加入无机或有机渗透剂（如 NaCl 或山梨糖醇）来增加渗透压。但是，细胞比生产率的提高与细胞生长的降低相结合，通常不会在产品产量方面带来整体收益。双相分批培养或逐渐增加渗透压、渗透保护成分和随后的继代培养已被成功地用于克服细胞生长抑制的问题。然而，这些研究大多数是在分批条件下进行的，高渗透压对补料批次培养的影响
重组蛋白的诱导 1. 接种含有重组氯霉素酰基转移酶蛋白的大肠杆菌BL21菌株于5mL LB液体培养基中（含100ug/mL 氨苄青霉素），37℃震荡培养过夜。 2. 转接1mL过夜培养物于100mL（含100ug/mL 氨苄青霉素）LB液体培养基中，37℃震荡培养至OD600 = 0.6 - 0.8。取10ul 样品用于SDS-PAGE 分析。 3. 加入IPTG至终浓度0.5 mmol/l, 37℃继续培养1-3h. 4. 12，000rpm 离心10 min, 弃上清，菌体
酶作用下连接入载体。4. 获得含重组表达质粒的表达菌种① 将连接产物转化大肠杆菌 DH5α，根据重组载体的标志（抗 Amp 或蓝白斑）作筛选，挑取单斑，碱裂解法小量抽提质粒，双酶切初步鉴定。② 测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确， 进入下步操作。否则应筛选更多克隆，重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。③ 以此重组质粒 DNA 转化表达宿主菌的感受态细胞。5. 氯霉素酰基转移酶重组蛋白的诱导① 接种含有重组氯霉素酰基转移酶蛋白的大肠杆菌 BL21 菌株于 5 mL LB 液体培养基中（含 100
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