2×YT培养基(,pH7.0),2×YT liquid me

双脱氧链终止法测定DNA序列的实验方法

① 制备电泳凝胶(可在前一天下班前进行)。 ② 检查实验计划及试剂。 ③ 预电泳。 ④ 预电泳的同时进行引物退火、链延伸及终止反应。 ⑤ 点样并电泳(根据需要可重复1-2次)。 ⑥ 固定、干燥凝胶。 ⑦ 放射自显影。 2．M13重组子的培养 ① 挑取单一的大肠杆菌集落加入3ml LB培养基中，37℃振荡培养直至A600光密度达到0.8-1.0为止。 ② 取200μl上述大肠杆菌培养物，加入含有2ml 2×YT培养基的试管中，再将插入待测DNA片段的M13单一

质粒提取常见问题分析

量很大，请分多次提取。若 用富集培养基，例如TB 或2×YT，菌液体积必须减少；若质粒或宿主菌是非常高 的拷贝数或生长率，则需调整LB培养液体积。 △ 质粒未全部溶解（尤其质粒较大时） 洗脱溶解质粒时，可适当加温或延长溶解时间。 △ 乙醇残留 漂洗液洗涤后应离心尽量去除残留液体，树脂型试剂盒漂洗后应晾干树脂，再加 入洗脱缓冲液。 △ 洗脱液加入位置不正确 洗脱液应加在硅胶膜中心部位以确保洗脱液会完全覆盖硅胶膜的表面达到最大洗脱 效率

质粒提取过程中常见的问题及参考见解

用抗生素使用浓度是否正确。 (4)、 碱裂解不充分：使用过多菌体培养液，会导致菌体裂解不充分，可减少菌体用量或增加溶液的用量。对低拷贝数质粒，提取时可加大菌体用量并加倍使用溶液，可以有助于增加质粒提取量和提高质粒质量。 (5)、 溶液使用不当：溶液2和3在温度较低时可能出现浑浊，应置于37℃保温片刻直至溶解为清亮的溶液，才能使用。 (6)、 吸附柱过载：不同产品中吸附柱吸附能力不同，如果需要提取的质粒量很大，请分多次提取。若用富集培养基，例如TB或2×YT，菌液体积必须