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低温
- 英文名:
SD/–Leu/–Met/–Trp Broth
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一、酵母培养基种类及用途
1.一缺培养基/单缺培养基
用于单质粒酵母转化筛选,外源基因在酵母中的表达、异源基因功能互补、酵母单杂交系统和酵母双杂交系统初始质粒转化。
2.二缺培养基/双缺培养基
用于双质粒酵母转化筛选,外源基因在酵母中的表达、异源基因功能互补、酵母单杂交系统和酵母双杂交系统初始质粒转化免疫共沉淀,Y187和AH109 酵母交配实验,接合型二倍体筛选。
3.三缺培养基
用于双质粒酵母转化筛选和报告基因检测,外源基因在酵母中的表达、异源基因功能互补、酵母单杂交系统和酵母双杂交系统报告基因检测 Y187和AH109 酵母交配实验后报告基因分析(His3,Ade2)。
4.四缺培养基
用于报告基因分析,酵母双杂交系统和酵母三杂交系统报告基因检测、Y187和AH10。
5.五缺培养基(订制)
用于报告基因分析和表型分析,酵母三杂交系统报告基因检测(His3,Ade2)、酵母营养缺陷型分离鉴定和表型分析。
6.六缺培养基(订制)
用于报告基因分析、表型分析和药物毒理分析,酵母三杂交系统报告基因检测、酵母营养缺陷型分离鉴定和表型分析、药物毒理分析。
注意事项:
1. GAL1启动子诱导表达要选用Minimal SD Agar Base Gal/Raf培养基。
2. 在配制酵母缺陷培养基时,培养基会变色,由浅黄到深褐色不等,对酵母的生长不会产生严重影响。
3. Minimal SD Agar Base Gal/Raf培养基高温高压下可能对诱导效果产生抑止,尤其是在做表达调节介导的功能互补实验需特别注意!
二、酵母培养基的配制
(1) Rich Liquid Media (Broth)
1. 取50克的YPD或者YPDA加1升的去离子水中溶解。
2. 调节pH 至6.5。121℃高压灭菌十五分钟。
3. 避光、室温条件下储存灭菌培养基。
(2) Rich Plating Media with Agar
1. 取70克的YPD Agar或者YPDA Agar加1升的去离子水中溶解(琼脂在高压灭菌后才能溶解)。
2. 调节pH 至6.5. 121℃高压灭菌十五分钟。
3. 冷却到50℃把培养基倒入平板中,室温使其凝固。封口膜封好后倒置保存在4℃冰箱。
(3) Minimal Liquid Media (Broth)
1. 根据下表在1 L去离子水中加入相应量的SD培养基和氨基酸混合物,搅拌溶解。
2. 调节pH 至5.8。121℃高压灭菌十五分钟。
3. 4℃冰箱避光储存已经灭菌的液体培养基。
(4) Minimal Plating Media with Agar
1. 根据下表,在1L去离子水中加入相应量SD培养基和氨基酸混合物,搅拌溶解(琼脂在高温灭菌后溶解)。
2. 调节pH 至5.8。121℃高压灭菌十五分钟。
3. 冷却到50℃把培养基倒入平板中,室温使其凝固。封口膜封好后倒置保存在4℃冰箱。
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文献和实验Mycoplasma Broth Recipes-PPLO Broth
200 ml 1000 ml 4000 ml Mycoplasma broth base (Gibco) 4.5 22.5 90
1.如果诱饵蛋白对酵母细胞是有毒的,该怎么办? 在某些情况下,在液体培养基中培养不好的菌珠可以在固体培养基上生长得很好。首先重悬克隆于1 ml的SD/–Trp,接着将重悬液平铺于5 个100-mm的SD/–Trp平板,在30 ℃下温浴,直至平板上的克隆相互粘在一起。用5 ml 0.5X YPDA刮下每块板上的克隆,并收集到一管中,这样就可以使用这个细胞重悬液进行正常的杂交反应。 2.如果诱饵蛋白能直接激活报告
Preparation of Broth and Plates, etc.
Recipes: 1) LB Broth Make 16 gm of LB Broth Base (Gibco #M27800C) up to 800 ml in ddH2O. Swirl to dissolve, then add 110 µl of 10 N NaOH. Autoclave. 2) NZY Broth
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