海肾荧光素酶活性检测试剂盒

【求助】荧光素酶活性，怪怪怪！！！

ddm_anny 各位大虾们，我最近在做一个基因启动子的活性检测，用的是promega 公司的试剂盒，构建了几个5’逐渐缺失的报告基因，做转染的时候用的是跨物种的T98G cell line, 选择peGFP来估计转染效率，同时用PGL-3-Control和PGL-3-Basic来估计整个测量系统，结果显示转染效率还是可以，主要是PGL-3-Control组的荧光素酶活性值达到25万，同时PGL-3-Basic组的读数还不到100，也就是说体系是没有问题的，关键

经验分享｜生物发光成像标记物选择

生物发光是一种依赖于酶和底物的相互作用来产生光的化学过程。所需的酶被称为荧光素酶，底物因荧光素酶的类型而不同（如荧光素）。 常用荧光素酶信息表： 其中最有代表性的是来自萤火虫体内（Firefly）和海肾（Renilla）体内的两类萤光素酶，分别命名为萤火虫荧光素酶（FLuc）和海肾荧光素酶（RLuc），同时近年来研究得较多的是来源于高斯氏菌的高斯荧光素酶（GLuc）。 萤火虫荧光素酶（FLuc）作为最通用和最常见的报告基因，该蛋白质不需要翻译后修饰即可获得酶活性，可用于原核和真核细胞。FLuc

荧光标记怎么选择？

反应需同时有 ATP、Mg2+、O2 的参与，发光波长为560nm，发光颜色呈黄绿色（图 1）。FLuc 通常作为报告基因，反映目的基因的表达情况。其转录翻译后无需修饰，即可具有酶活性。 图 1. FLuc 与荧光素的反应式 海肾荧光素酶（RLuc）：RLuc 催化腔肠素发光需要 O2 的参与，发光波长为 465nm，发光颜色为蓝色（图 2）。在双荧光素酶报告系统中，RLuc 通常作为内参报告基因。RLuc 也无需翻译后修饰，即可形成酶活性。 图 2. RLuc 与腔肠素的反应式 荧光蛋白和荧光素酶的区别 荧