北京现货细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒(国产,进口)

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产销售北京现货细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒(国产,进口)，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京现货细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒(国产,进口)
规格：50T/200T
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
编号：XH063
在研究细胞时经常要研究细胞的不同组份，而研究得最多的两个细胞组份就是细胞核和细胞浆。分离细胞核蛋白和细胞浆蛋白，不仅可以用于研究蛋白在细胞内的定位，而且很多时候分离出来的核蛋白可以用于转录调控方面的研究，例如EMSA(也称gelshift)，footprinting等。
细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒(Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit)提供了一种比较简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提细胞核蛋白与细胞浆蛋白的方法。约90分钟就可以完成培养细胞的细胞核蛋白与细胞浆蛋白的分离。抽提得到的蛋白可以用于Western，EMSA，footprinting，报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。
本试剂盒是通过细胞浆蛋白抽提试剂A和B，在低渗透压条件下，使细胞充分膨胀，然后破坏细胞膜，释放出细胞浆蛋白，然后通过离心得到细胞核沉淀。最后通过高盐的细胞核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。
本试剂盒可以抽提50个样品，如果每个样品的数量为约二百万细胞或约60毫克组织。
包装清单：

储存条件：-20℃，有效期一年。
注意事项：
PMSF一定要在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。
抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
本试剂盒对于组织样品，仅适合于新鲜组织，对冻存过的组织抽提效果很差。可以抽提的组织样品数通常不足100个。
使用本试剂盒抽提到的细胞核蛋白与细胞浆蛋白均可直接用我们生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。但不适合用Bradford法测定蛋白浓度。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. 准备溶液：温融解试剂盒中的三种试剂，溶解后立即放置在冰上，混匀。取适当量的细胞浆蛋白抽提试剂A备用，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。取适当量的细胞核蛋白抽提试剂备用，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
2. 对于贴壁细胞：用PBS洗一遍，用细胞刮子刮下细胞，或用EDTA溶液处理细胞使细胞不再贴壁很紧，并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞，尽最大努力吸尽上清，留下细胞沉淀备用。尽量避免用胰酶消化细胞，以免胰酶降解需抽提的目的蛋白。
3. 对于悬浮细胞：用PBS洗一遍，离心收集细胞，尽最大努力吸尽上清，留下细胞沉淀备用。
4. 每20微升细胞沉淀加入200微升添加了PMSF的细胞浆蛋白抽提试剂A。(对于二百万Hela细胞，其细胞沉淀的体积大约为20微升或40毫克。)
5. 最高速剧烈Vortex 5秒，把细胞沉淀完全悬浮并分散开。(如果细胞沉淀没有完全悬浮并分散开，可以适当延长vortex时间。)
6. 冰浴10-15分钟。
7. 加入细胞浆蛋白抽提试剂B 10微升。最高速剧烈Vortex 5秒，冰浴1分钟。
8. 最高速剧烈Vortex 5秒，4℃ 12,000-16,000g离心5分钟。
9. 立即吸取上清至一预冷的塑料管中，即为抽提得到的细胞浆蛋白。可以立即使用，也可以冻存。(千万不要触及沉淀，可以在沉淀上方保留极小体积的上清，以免触及沉淀。)
10. 对于沉淀，完全吸尽残余的上清，加入50微升添加了PMSF的细胞核蛋白抽提试剂。(不吸尽上清会带来细胞浆蛋白的污染。)
11. 最高速剧烈Vortex 15-30秒，把细胞沉淀完全悬浮并分散开。然后放回冰浴中，每隔1-2分钟再高速剧烈Vortex 15-30秒，共30分钟。
12. 4℃ 12,000-16,000g离心10分钟。
13. 立即吸取上清至一预冷的塑料管中，即为抽提得到的细胞核蛋白。可以立即使用，也可以-70℃冻存。
14. 对于新鲜组织：
A. 把组织尽可能切成非常细小的碎片。按照20:1的比例混合适当量的细胞浆蛋白抽提试剂A和B(例如200微升细胞浆蛋白抽提试剂A中加入10微升抽提试剂B)。并加入PMSF至最终浓度为1mM配制成组织匀浆液。按照每60mg组织加入200微升组织匀浆液的比例混合组织和组织匀浆液，并在玻璃匀浆器内充分匀浆。匀浆需在冰浴或4℃进行。
B. 匀浆后把匀浆液转移到塑料离心管内，冰浴放置15分钟。
C. 4℃ 1,500g离心5分钟。把上清转移至一预冷的塑料管中，为抽提得到的部分细胞浆蛋白。(吸上清时千万不要触及沉淀。)
D. 对于沉淀，到了这一步已经充分匀浆，但很多细胞还没有破碎。接下去按照使用说明的步骤4开始操作，即把沉淀当做已经离心收集好的细胞沉淀操作，按照步骤4至步骤13抽提得到细胞浆蛋白和细胞核蛋白。抽提得到的细胞浆蛋白可以和步骤14C中抽提得到的细胞浆蛋白合并。

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·ECL超敏发光液
编号：XH057
规格：25ml/100ml/250ml
储存条件：2～8℃，有效期一年。

产品简介
ECL化学发光液在HRP的催化下发生化学反应而发光，可用于检测固定在膜上的蛋白质等生物大分子。使用照相技术（X-光胶片曝光）或者其他成像方法（如荧光或化学发光成像仪）进行检测。
我们的ECL超敏发光液是在普通的化学发光液基础之让改进而来，相对于普通发光液来说，灵敏度更高，检测下限更低，可达到pg级别的抗原，并且一抗和二抗的稀释度更高。
本产品在5分钟后光强达到最大，在30分钟时光强还能维持80%（以5分钟时光强为基础）。最终发光时长可达一小时。
操作步骤
1.在二抗孵育完毕后，将发光液从冰箱取出到室温平衡。将印迹膜充分洗涤。
2.根据需要量，将ECL超敏发光液A和ECL超敏发光液B按照1：1的比例等体积混合，配制为化学发光检测底物工作液（例如：一张8cm×6cm的膜使用2ml工作液，为节省试剂，初次实验可用洗涤缓冲液测试，以最少的液体盖住整个膜的表面）。
3.弃去洗涤缓冲液，转移到暗室或者避光盒里操作，将发光底物工作液滴加在印迹膜上，确保工作液覆盖整张膜，室温孵育5分钟。
4.去掉多余发光底物工作液，将印迹膜置于两层干净的塑料薄膜之间，此过程应小心完成，避免膜与膜之间产生气泡。
5.在暗室内进行X-光胶片曝光，或将膜放置到荧光、化学发光成像仪内，按照仪器说明书进行检测。
6.因本产品发光发光超度高，发光时间长，所以为得到理想的结果，可多次曝光（不同时长）以得到理想的结果。
注意事项
1.为获得最佳实验结果，请务必优化实验条件，包括检测样品的用量、一抗、二抗稀释度、杂交膜及封闭试剂的选择，并且发光液请现用现配。
2.建议在封闭缓冲液及所有抗体稀释液中加入高质量的吐温-20（终浓度为0.05%），以减少非特异性结合。
3.由于叠氮钠是HRP抑制剂，在缓冲液中应避免使用叠氮钠作为防腐剂。
4.免疫印迹实验进行全过程中，请确保印迹膜始终处于湿润状态，避免干燥。
5.在与膜发生接触过程中请佩戴手套或者使用洁净镊子，避免蛋白污染。
6.实验过程中，请使用洁净器材。保证非金属设备没有明显划痕，金属设备表面无锈。锈可能导致膜上带有污点或者高背景。


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·5×蛋白上样缓冲液（含DTT）
编号：XH066
规格：1ml/10ml
产品简介：
本产品适用于SDS-PAGE(SDS变性聚丙烯酰胺凝胶电泳)时作蛋白质上样用。其主要成份为SDS，DTT，溴酚蓝，缓冲盐溶液等。
SDS可与蛋白质结合使蛋白质－SDS复合物上带有大量的负电荷，这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖，消除了各种蛋白质本身电荷的差异，SDS还可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质分子的二级和三级结构，DTT可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键，破坏蛋白质的四级结构，消除了蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白（亚单位），电泳速度只是与其分子量大小有关。溴酚蓝用作电泳时的指示剂，可大概指示电泳结束的时间。

储存条件：-20℃，有效期一年。
使用说明：
1．请按每40微升蛋白样品加入10微升上样缓冲液的比例来使用。如果蛋白浓度过高，可用双蒸水稀释。
2．混匀后，100℃水浴加热3-5分钟，使蛋白变性。
3．冷却到室温后，离心数秒后，混均再离心30秒取上清直接上样即可。
注意事项：
8%胶时溴酚蓝大概在30kd左右， 12%胶时，约在20kd左右，15%胶时，大概在10kd。请根据自己目标条带来判断结果电泳时间。
本试剂因含DTT，有一定的毒性，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。


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·鲑鱼精DNA(10mg/ml)
编号：XH017
规格：1ml
此溶液已经经过处理，可以直接用于DNA杂交。原料来自于SIGMA。
处理配制方法如下：
1. 称取鲑鱼精DNA 2 g置于500 ml烧杯中，加入约200 ml的TE Buffer。
2. 用磁力搅拌器室温搅拌2～4小时，溶解后加入4 ml的5 M NaCl，使其终浓度为0.1 M。
3. 使用氯*(代"仿")抽提两次。加大约2倍体积，取上面冻状物。
4. 回收水相溶液后，使用17号皮下注射针头快速吸打溶液约20次，以切断DNA。
5. 加入2倍体积的预冷乙醇进行乙醇沉淀。
6. 离心回收DNA后，溶解于100 ml的去离子水中，测定溶液的OD260值。
7. 计算溶液的DNA浓度后，稀释DNA溶液至10 mg/ml。
8. 煮沸10分钟后，分装成小份（1 ml/份)。-20℃保存。
9. 使用前在沸水浴中加热5分钟后，迅速冰浴冷却。

·Tris-甘氨酸蛋白电泳缓冲液（干粉）
编号：XH059
规格：10L
所用试剂：Tris碱，甘氨酸和 SDS
含量配方： 30.3 Tris碱
188g 甘氨酸
10g SDS
此产品为干粉混合物。用时可以用双蒸水溶解成1L，配成10倍浓缩液，用时再稀释10倍。
配好的电泳液用于SDS－PAGE蛋白电泳。可反复使用三到五次，如果发现有明显沉淀或者漂浮时，请丢弃换新的。

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