蛋白质电泳分子量标准（蛋白marker 3.3-20.1 K

干货：小分子量蛋白（11KD）WB实验艰辛历程及经验总结

个人工作多年以后再回来读博的，所以实验技术什么的从头学起，这其中WB走的弯路最多，现在就和大家聊聊我个人的历程，并交流一下自己的经验。这个经验是我跑一个11KD分子量分泌性蛋白得出的，肯定不会适用于所有情况，但是论坛里面受困于小分子量蛋白WB的朋友还是很多，所以聊胜于无，在此分享一下。我搞得蛋白质是一个11KD的分泌性蛋白，并且是我实验设计中一个重要的指标，最初学习WB技术，受困于二抗不合格一直连内参都做不出来。。。后面改换抗体之后，才相对顺利一点，其他指标也相继出来了。所以抗体真的很重

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量（垂直板型电泳）（图）

。标准蛋白质的相对迁移率（蛋白质的电泳迁移距离除以染料迁移距离即为相对迁移率，详见后）最好在0.2～0.8之间均匀分布。 在凝胶电泳中，影响迁移率的因素较多，而在制胶和电泳过程中，很难每次都将各项条件控制得完全一致，因此，用SDS-凝胶电泳法测定分子量，每次测定样品必须同时做标准曲线，而不得利用另一次电泳的标准曲线。 3．有许多蛋白质，是由亚基（如血红蛋白）或两条以上肽链（如α-胰凝乳蛋白酶）组成的，它们在SDS和巯基乙醇的作用下，解离成亚基或单条肽链。因此，对于这一类蛋白质，SDS-凝胶电泳

IASYS-binding cuvette and getting KD

of ligands to the carboxymethylated dextran coated cuvette (1) Dissolve 0.2 g N-Hydroxysuccinimide (NHS)in 15 ml of deionized H2O to get 0.0133 g/ml (0.116 mol/L)concentration and aliquot into 250 µl volume and store in a -20 ℃ freezer. (2) Dissolve 1.15 g