PBS稀释液（磷酸盐缓冲液）/抗体稀释液

免疫组化技术实用案例课程：第一期

用血清封闭室温1h，其它条件同做出来的那一次，结果也一样背景着色很深。 4、此外，我在改进的同时，也对PBS清洗不断地延长时间和增加次数，甚至完全参照试剂盒说明书来进行操作（我以前一般一抗4度过夜且室温复温45min、二抗37度30min、Sp反应37度30min），以及过氧化氢灭活加强等等均未起到效果。 我冷静地分析了一下整个实验流程，与第一次做出来相比，只有两个地方做了改动：因血清不够而更换了不同厂家试剂盒、因抗体稀释液用完而重新买了抗体稀释液。 5、我用PBS替代一抗稀释液

免疫组化经验总结

浓度和孵育时间。建议一抗反应在 4 ℃最佳，反应温和，但时间最好超过 16~24 h。   9）抗体稀释液 其实许多实验室抗体稀释液就用一般 PBS 即可，但专用的抗体稀释液中除PBS 成份外，还加了叠氮化钠防腐剂、BSA 稳定剂等组份，对抗体的多次回收利用较好。正因为这种原因，我一直用国产的专用抗体稀释液，一段时间在更换新抗体稀释液时实验结果出现了阴性结果（提示可能一抗没有结合），最后从抗体浓度和孵育时间、封闭时间等原因排除后，发现是新抗体稀释液的 PH 值偏酸，而使抗原

【原创】暗室实验（化学发光底物检测方法）及Western Blot实验优化方法

%的Tween-20 封闭液封闭膜上的非特异性点，室温震荡孵育1 h。 5. 将一抗稀释到封闭液/Tween-20 去污剂中，并加到膜上，室温震荡孵育1h。 6. 用TBS 或PBS 洗膜4-6 次，用尽可能大体积的洗脱液，在洗脱液中加入0.05%的吐温，用以减少非特异背景。每次洗脱过程中，使膜悬浮在洗脱液中震荡大约5 分钟，倒出洗脱液并重复。孵育前，在洗脱液中短时间的漂洗可能会增加洗脱效率。 7. 制备二抗/HRP 结合的封闭试剂/Tween-20 去垢剂稀释液，将二抗稀释液加到膜上震荡孵育1 h