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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期:
6-12months
- 英文名:
Recombinant Myosin IF (MYO1F)
- 库存:
大量
- 供应商:
泽叶生物
- 规格:
50ug/100ug/1mg
上海泽叶生物科技有限公司是一家集研发、生产和销售于一体的生命科学实验室产品创新性高科技企业。主要从事免疫学,重组蛋白,细胞因子,抗原/多肽/蛋白等产品主要包括免疫调节蛋白、白细胞介素、CSFs、生长因子、干扰素、Chemokines 、Adipokines 、TGFß / BMP Proteins、神经因子、FGFs和TNF配体/受体防御因子等。并代理销售Amresco,qiagen Millipore,eBioscience,Sigma,SANTA,Sciencell,R&D、GBD、ATCC、HYCLONE, CELLutions Biosystems INC , Neuromics , Chemicon, Equitech-bio, Biovision, Promega, Kamiya, Prospec, Cytoskeleton, Novagen, SurModics, Cytelligen LONZA等二十多家国外知名品牌,致力于为广大高校、科研院所和企事业单位提供一流的科研试剂和完善的技术服务。
经甲醛固定的部分组织细胞,因固定过程中可能会形成醛键或羧甲基而封闭部分抗原决定簇,使免疫组化标记敏感性明显降低,因此在染色前,有些抗原需进行修复或暴露。
抗原修复方法可分为化学方法和物理方法。化学方法是以酶消化方法,常用胰蛋白酶及胃蛋白酶,配制浓度与消化时间要适度。常用的物理方法有单纯加热、微波处理和高压加热。在选用这三种方法时,浸泡切片的缓冲液的离子强度和pH、加热的温度和时间均影响着抗原修复效果。
1、pH的应用范围及选择
抗原修复液的pH非常重要,有效的抗原修复pH要比修复液的化学成分更重要,同样的修复液随着pH的升高染色的强度逐渐增强,但最佳pH范围为6.0-10.0。目前大家公认的最好的抗原修复液是pH6.0的柠檬酸盐缓冲液和pH8.0的EDTA缓冲液。作为通用修复液碱性pH的修复液要比酸性的有效,而对固定很长时间旧的存档组织,酸性pH的修复液则优于碱性的修复液。
2、抗原修复时应选择最佳温度
70-90℃的温度对未经固定的蛋白质可发生变性,但经福尔马林固定的蛋白质,温度必须达到92℃以上方能使其变性。研究结果显示,温度为92-98℃是合适的,95℃效果最好。
3、抗原修复液必须遵循自然降温规律,否则效果不好或达不到抗原修复的目的
抗原修复持续时间过后,取出放于室温中让其慢慢地降温,绝对不能为了争取时间,强行用冰块或冷水使其降温。这是因为当高温中的抗原蛋白分子链脱离了其他的束缚或联结,要有一个自然环境让其自然放松下来,随着温度的降低,它们会慢慢地恢复原来的形态和构型。
4、尽量使用足量的抗原修复液
应用于抗原修复的液体,一定要充足,防止切片干涸。应用大量的抗原修复液时,由于它的量较大,可延缓液体的沸腾时间,增加切片受微波辐射的量,对抗原修复将达到彻底。
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文献和实验Invitrogen的王牌:Lipofectamine 2000转染试剂
基的选择:哺乳动物细胞系合成可溶的,翻译后修饰的蛋白,比细菌,真菌或昆虫细胞中表达的蛋白更有可能有生物活性。稳定转染的细胞可以合成大量的重组蛋白,而瞬时转染细胞可以快速表达,迅速地合成小量蛋白。常用的细胞系包括CHO,293和COS-7。Invitrogen提供克隆的293-F,293-H,COS-7和CHO-S细胞,来源于经筛选转染效率更高的亚细胞系。这些细胞也可用于无血清和限定化学成分培养基。重组蛋白的大规模生产一般在稳定转染的悬浮细胞中进行。这些细胞易于生长到高密度并合成更多蛋白。使用基质珠做为
细胞,从而诱导细胞产生适应性免疫反应。HEK293 细胞因其高转染效率、易于培养和大量产生外泌体的能力,作为外泌体供体被广泛应用于各种研究。与干细胞相比,HEK293 细胞系的大规模培养条件相对完善、技术更加成熟。尽管最初的 HEK293 细胞系是一个贴壁细胞系,但研究人员通过驯化已经建立了许多能够进行悬浮培养的HEK293 衍生的细胞系, 如 HEK293S、HEK293F 等。此外,HEK293 还被广泛应用于生物药物的生产,对该细胞系使用最常见的转染试剂能够表现出高转染效率,同时该细胞系生长速率高
体启动子的情形下,大肠杆菌宿主本身基因的 转录竞争不过T7噬菌体转录体系,最终受T7噬菌体启动子控制的基因 的转录能达到很高的水平。 T7噬菌体启动子的转录完全依赖于T7 RNA聚合酶,因此T7 RNA聚 合酶的转录调控模式就决定了表达系统的调控方式。噬菌体DE3是λ噬 菌体的衍生株,一段含有lacⅠ,lacUV5启动子和T7 RNA聚合酶基因的 DNA片段倍插入其int基因中,用噬菌体DE3的溶源菌,如BL21(DE3)、 HMS174(DE3)等作为表达载体 的宿主
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