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-20℃
- 保质期:
6-12months
- 英文名:
Recombinant Acyloxyacyl Hydrolase (AOAH)
- 库存:
大量
- 供应商:
泽叶生物
- 规格:
50ug/100ug/1mg
上海泽叶生物科技有限公司是一家集研发、生产和销售于一体的生命科学实验室产品创新性高科技企业。主要从事免疫学,重组蛋白,细胞因子,抗原/多肽/蛋白等产品主要包括免疫调节蛋白、白细胞介素、CSFs、生长因子、干扰素、Chemokines 、Adipokines 、TGFß / BMP Proteins、神经因子、FGFs和TNF配体/受体防御因子等。并代理销售Amresco,qiagen Millipore,eBioscience,Sigma,SANTA,Sciencell,R&D、GBD、ATCC、HYCLONE, CELLutions Biosystems INC , Neuromics , Chemicon, Equitech-bio, Biovision, Promega, Kamiya, Prospec, Cytoskeleton, Novagen, SurModics, Cytelligen LONZA等二十多家国外知名品牌,致力于为广大高校、科研院所和企事业单位提供一流的科研试剂和完善的技术服务。
经甲醛固定的部分组织细胞,因固定过程中可能会形成醛键或羧甲基而封闭部分抗原决定簇,使免疫组化标记敏感性明显降低,因此在染色前,有些抗原需进行修复或暴露。
抗原修复方法可分为化学方法和物理方法。化学方法是以酶消化方法,常用胰蛋白酶及胃蛋白酶,配制浓度与消化时间要适度。常用的物理方法有单纯加热、微波处理和高压加热。在选用这三种方法时,浸泡切片的缓冲液的离子强度和pH、加热的温度和时间均影响着抗原修复效果。
1、pH的应用范围及选择
抗原修复液的pH非常重要,有效的抗原修复pH要比修复液的化学成分更重要,同样的修复液随着pH的升高染色的强度逐渐增强,但最佳pH范围为6.0-10.0。目前大家公认的最好的抗原修复液是pH6.0的柠檬酸盐缓冲液和pH8.0的EDTA缓冲液。作为通用修复液碱性pH的修复液要比酸性的有效,而对固定很长时间旧的存档组织,酸性pH的修复液则优于碱性的修复液。
2、抗原修复时应选择最佳温度
70-90℃的温度对未经固定的蛋白质可发生变性,但经福尔马林固定的蛋白质,温度必须达到92℃以上方能使其变性。研究结果显示,温度为92-98℃是合适的,95℃效果最好。
3、抗原修复液必须遵循自然降温规律,否则效果不好或达不到抗原修复的目的
抗原修复持续时间过后,取出放于室温中让其慢慢地降温,绝对不能为了争取时间,强行用冰块或冷水使其降温。这是因为当高温中的抗原蛋白分子链脱离了其他的束缚或联结,要有一个自然环境让其自然放松下来,随着温度的降低,它们会慢慢地恢复原来的形态和构型。
4、尽量使用足量的抗原修复液
应用于抗原修复的液体,一定要充足,防止切片干涸。应用大量的抗原修复液时,由于它的量较大,可延缓液体的沸腾时间,增加切片受微波辐射的量,对抗原修复将达到彻底。
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文献和实验包涵体复性常见问题分析 1. 对于尿素和盐酸胍该怎么选择? 尿素和盐酸胍属中强度变性剂,易经透析和超滤除去。它们对包涵体氢键有较强的可逆性变性作用,所需浓度尿素8-10M,盐酸胍6-8M。尿素溶解包涵体较盐酸胍慢而弱,溶解度为70-90%,尿素在作用时间较长或温度较高时会裂解形成氰酸盐,对重组蛋白质的氨基进行共价修饰,但用尿素溶解具有不电离,呈中性,成本低,蛋白质复性后除去不会造成大量蛋白质沉淀以及溶解的包涵体可选用多种色谱法纯化等优点,故目前已被广泛采用。 盐酸胍溶解能力达95
亦起了极为重要的作用。本文主要从表达系统及其两个组成部分——表达载体和宿主细胞等方面,简要介绍哺乳动物细胞表达系统和相关的研究进展。 研究现状 ①部分蛋白在哺乳动物细胞中的表达已从实验室研究迈向生产或中试生产阶段。 ②已有许多重要的蛋白及糖蛋白利用哺乳动物细胞系统表达和大量制备、生产。如人组织型血纤蛋白酶原激活因子、凝血因子Ⅷ、干扰素、乙肝表面抗原、红血球生成激素、人生长激素、人抗凝血素Ⅲ,集落刺激因子等。有些产品已投入临床应用或试用。
经过变性、复性才能获得天然结构以及生物活性,因此应该选择一个合适的复性过程来实现蛋白质的正确折叠,获得生物活性,近年来的研究可以使复杂的疏水蛋白、多结构域蛋白、寡聚蛋白、含二硫键蛋白在体外成功复性。 包涵体形成的原因 重组蛋白在宿主系统中高水平表达时,无论是原核表达体系或真核表达体系甚至高等真核表达体系,都会形成包涵体[2]。主要因为在重组蛋白的表达过程中,缺乏某些蛋白质折叠过程中需要的酶和辅助因子,或环境不适,无法形成正确的次级键等原因形成的[3]。 1、 表达量过高,研究发
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