pTagRFP-C载体

体外转录实用技巧

了这一过程。以下列出了其他一些策略，用于增加有问题的转录反应中的全长产物比例。 增加限制性核苷酸的浓度 用最低浓度的标记核苷酸进行转录反应，可能由于核苷酸浓度不足而产生过早终止的转录组。增加限制性核苷酸的浓度通常会提高全长转录组的产量。 降低反应的孵育温度 通常，转录反应在室温或 37°C 下进行。将温度降低至约 16°C 或甚至 4°C 有时可以改善转录反应。人们认为，较低的反应温度会减慢聚合酶的进展，从而防止其被二级结构或一个特定核苷酸串置换。（想象一下玩具火车全速绕弯前行与缓慢绕同一条路线前行

RNAi技术专题之：体外转录合成双链RNA

的序列方可选用。2. 高效siRNA的序列结构特征除了靶序列位点的选择，siIRNA序列本身结构特征亦会影响到RNAi效率。RNAi实质上可视为一个RNA与蛋白质互作过程，包括siRNA与RISC结合、RISC的激活以及RISC与靶mRNA的结合和切割，这种互作效应的存在，往往造成siRNA链的选择具有偏爱性。Reynolds等通过对2个基因的180条siRNA序列分析，归纳出以下8个与siRNA高效性相关的特征:G/C含量低(30%-52%)，正义链3’端具较低稳定性（有利于siRNA与RISC

基因递送的多面手：慢病毒载体

了恶性表型。 代谢组学、蛋白质组学以及 ECAR 和 OCR 测试揭示了 ADPGK 显著加速了 PCa 的糖酵解。 ADPGK 与丙酮酸激酶 C（ALDOC）结合，通过 AMP 激活蛋白激酶（AMPK）磷酸化促进糖酵解。 图 2 用于 ADPGK 过表达的慢病毒结构示意图及 ADPGK 过表达结果。   案例 2：用慢病毒载体递送 RNA 干扰工具，研究脯氨酸羟化酶结构域蛋白在调节心肌细胞钙水平中的功能[2] 由于高氧消耗，心肌细胞对环境中的氧气极为敏感。脯氨酸羟化酶结构域蛋白 2（PHD