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- 2025年07月14日
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慢病毒感染细胞种类广泛，其基因可以整合到宿主细胞的基因组中，从而可以实现目的基因的稳定、长时间表达。因此，慢病毒常用于制备稳定表达/沉默特定基因的细胞系。在得到慢病毒颗粒后，将慢病毒与目的细胞进行孵育转染，转染后的细胞，经过药筛或eGFP流式分选从而得到过表达或敲降的稳定转染细胞系。
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文献和实验G418溶于10ml 1M HEPES(pH7.3)，终浓度为500mg/ml，-20℃保存。 注：实验中采用方案二时效果较好。 2.制备筛选培养基： 用培养基将G418稀释为0 ug/ml 、200 ug/ml 、300 ug/ml 、400 ug/ml、500 ug/ml 、600 ug/ml 、700 ug/ml 、800 ug/ml、900ug/ml、1000ug/ml、1100ug/ml、1200ug/ml 24孔板，每孔1ml培养基(含有G418的完全
进一步筛选，以确定最佳筛选浓度！心得：由于特性明确的细胞系G418的最佳用量还是比较稳定的，所以有时候不需要在这么大范围内进行筛选。比如说你要转染NIH3T3细胞，现在我告诉你我测试过NIH3T3细胞对G418的敏感性，我用的筛选浓度是200 ug/ml，这时你就可以做150ug/ml、200ug/ml、 300ug/ml三个浓度进行筛选。通过预实验确定了最佳筛选浓度后，就可以做稳定转染了。a 转染：转染后培养24小时或者更长，到细胞增长接近汇合时按1:4密度传代，继续培养，待细胞密度增至50
就把所有细胞都杀死了，则可以再用500ug/ml、600ug/ml、700ug/ml进一步筛选，以确定最佳筛选浓度！心得：由于特性明确的细胞系G418的最佳用量还是比较稳定的，所以有时候不需要在这么大范围内进行筛选。比如说你要转染NIH3T3细胞 ，现在我告诉你我测试过NIH3T3细胞对G418的敏感性，我用的筛选浓度是200 ug/ml。这时你就可以做150ug/ml、200ug/ml、 300ug/ml三个浓度进行筛选。 通过预实验确定了最佳筛选浓度后，就可以做稳定转染了。 a 转染
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