- ￥1680
- ATCC,ECACC,ScienCell, DSMZ, RIKEN 等
- 进口/国产
- JNO171-732
- 2025年11月23日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
99
- 细胞类型：
科研
- 物种来源：
鼠/人/其它
- 细胞形态：
上皮样/成纤维样/其它
- 运输方式：
常温运输/干冰运输
- 生长状态：
贴壁/悬浮
- 规格：
25T
细胞常规说明：
培养条件：89%基础培养基+10%FBS+1%双抗
冻存液成分：10%DMSO+40%FBS+50%基础培养液
细胞质检情况：不含细菌、真菌、支原体等微生物污染
传代建议：1:2~1:3传代，2~3天换液1次
特别提醒：签收细胞后，如细胞状态不佳，或培养中遇到问题，烦请当天尽快联系，以便处理。当天及时反馈细胞情况和细胞照片是售后跟踪处理重要的参考依据，请务必重视。
悬浮细胞接收后的操作流程与注意事项
1.如签收时出现培养瓶壁破裂，漏液等情况请及时做好照片记录并联系实验室
2.拧松瓶盖，细胞瓶竖立培养8h（或过夜）
3.待细胞沉底后吸除上层液体（含碎片残渣，请小心操作），然后吸取沉底的细胞层（2ML左右转移到新的培养瓶，加入新鲜的完全培养基（如细胞状态较差可将血清浓度调高到15%）继续培养
悬浮细胞常规培养传代流程（请严格遵照无菌操作）
1.将培养瓶/皿中的细胞重悬混匀
2.吸取2/3或者一半混匀后的细胞悬液到新的培养瓶/皿
3.分别在原瓶/皿和新分瓶的培养瓶/皿加入等量或者2倍的新鲜培养基，使细胞密度保持在5 X10(5) /ml左右
4.注意培养基PH值变化情况和细胞密度，定期半量换液（每周2-3次），待细胞密度大于2 X 10(6) /ml以后重复1项操作或者冻存
贴壁细胞接收后的操作流程与注意事项
1.收到细胞当天尽快更换新鲜完全培养基，第二天再进行消化处理
2.如果细胞收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态，请将悬浮的细胞即时离心，加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶继续培养观察。同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基，培养观察
3.若出现生长不均：贴壁细胞若出现分布不均，成岛状生长，可将细胞进行消化，重悬打散细胞，加入新鲜培养基进行培养
贴壁细胞常规培养传代流程（请严格遵照无菌操作）
1.吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加适量0.25%胰酶进行消化细胞（注意把握消化时间）
2.镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时（不建议消化到细胞漂浮）去掉胰酶，加6~8ml 完全培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散
3.取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的完全培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养
4.注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项作或者冻存
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文献和实验成熟的 crRNA。在 II 型系统中，Pre-crRNA 可通过重复序列与其互补序列 transacting RNA（trancrRNA）反式结合，然后在 Cas9 存在的情况下被 RNaseIII 加工融合成一个 sgRNA。目前，II 型系统是最成熟也是应用最广的类型，而 Cas9 已经变成了在多种细胞类型和组织中靶向基因编辑的强大工具。第三阶段：靶向干扰（Target interference）I 型和 II 型系统均可靶向含有与 PAM 和 protospacer 互补序列的 dsDNA
CRISPR/Cas9 系统作为细菌和古细菌的获得性免疫系统， 通过 RNA 介导特异性的切割外源遗传物质， 用以对抗入侵的病毒和质粒。利用 Cas9 来摧毁入侵 DNA 的 Type Ⅱ CRISPR/Cas 系统， 可以在体外进行基因的编辑。为了提高CRISPR/Cas9 的特异性，使用 Cas9 切口酶和一对 sgRNA，两个相近的切口造成 DNA 双链断裂， 诱导细胞发生非同源末端连接修复， 造成目的基因的突变。利用 CRISPR/Cas9 进行基因的编辑，首先要构建有效的 sgRNA
生物界一系列惊人的发现改变了这个学科，也让生物学家们以前所未有的方式对细胞上下其手。当然，这要感谢原核生物们进化出的这一套稀奇古怪的免疫系统。一系列的研究揭示出了细菌这一免疫系统的运作方式，并很快挖出名为 Cas9 蛋白的幕后黑手，一个受 RNA 引导的 DNA 内切酶。疯狂的科学家们很快发现了 Cas9 蛋白编辑基因组的潜在能力，并做出了一系列的探索。 两年前，一些研究表明通过 Cas9 蛋白和向导 RNA 的在真核细胞中共表达，可以实现位点特异性的 DNA 编辑，到如今上千
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