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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
99
- 细胞类型:
科研
- 物种来源:
鼠/人/其它
- 细胞形态:
上皮样/成纤维样/其它
- 运输方式:
常温运输/干冰运输
- 生长状态:
贴壁/悬浮
- 规格:
25T
细胞常规说明:
培养条件:89%基础培养基+10%FBS+1%双抗
冻存液成分:10%DMSO+40%FBS+50%基础培养液
细胞质检情况:不含细菌、真菌、支原体等微生物污染
传代建议:1:2~1:3传代,2~3天换液1次
特别提醒:签收细胞后,如细胞状态不佳,或培养中遇到问题,烦请当天尽快联系,以便处理。当天及时反馈细胞情况和细胞照片是售后跟踪处理重要的参考依据,请务必重视。
悬浮细胞接收后的操作流程与注意事项
1.如签收时出现培养瓶壁破裂,漏液等情况请及时做好照片记录并联系实验室
2.拧松瓶盖,细胞瓶竖立培养8h(或过夜)
3.待细胞沉底后吸除上层液体(含碎片残渣,请小心操作),然后吸取沉底的细胞层(2ML左右转移到新的培养瓶,加入新鲜的完全培养基(如细胞状态较差可将血清浓度调高到15%)继续培养
悬浮细胞常规培养传代流程(请严格遵照无菌操作)
1.将培养瓶/皿中的细胞重悬混匀
2.吸取2/3或者一半混匀后的细胞悬液到新的培养瓶/皿
3.分别在原瓶/皿和新分瓶的培养瓶/皿加入等量或者2倍的新鲜培养基,使细胞密度保持在5 X10(5) /ml左右
4.注意培养基PH值变化情况和细胞密度,定期半量换液(每周2-3次),待细胞密度大于2 X 10(6) /ml以后重复1项操作或者冻存
贴壁细胞接收后的操作流程与注意事项
1.收到细胞当天尽快更换新鲜完全培养基,第二天再进行消化处理
2.如果细胞收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态,请将悬浮的细胞即时离心,加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶继续培养观察。同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基,培养观察
3.若出现生长不均:贴壁细胞若出现分布不均,成岛状生长,可将细胞进行消化,重悬打散细胞,加入新鲜培养基进行培养
贴壁细胞常规培养传代流程(请严格遵照无菌操作)
1.吸出原培养瓶中的培养基,PBS缓冲液润洗细胞两次,加适量0.25%胰酶进行消化细胞(注意把握消化时间)
2.镜下观察消化情况,在细胞边缘缩小,贴壁松动时(不建议消化到细胞漂浮)去掉胰酶,加6~8ml 完全培养基,轻轻吹打细胞层,尽量把细胞层吹落,吹散
3.取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中,添加适当的完全培养基,把细胞悬液打匀,于培养箱中培养
4.注意培养基PH值变化情况,定期换液(每周2-3次),待细胞密度达到80%以后重复1项作或者冻存
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文献和实验W. R. Earle( 1943)从正常雄 C3H/ Am系小白鼠的皮下组织分离出来的连续继代培养的成纤维细胞系。开始是用含马血清 30%、鸡胚浸出液( 1∶ 1) 20%、 Earle缓冲液 50%的培养液培养。不用胰蛋白酶处理,只用移液管即可分离出来,形成细胞悬浮液。因系 L实验组而命名,在 L之外无连续继代培养细胞系的报道。为最初现存的确立细胞株( Esta· blished cell line),与人子宫癌海拉( HeLa)细胞一起广泛应用于种种目的的实验。 L细胞
的PBS)终止红细胞裂解,300g离心细胞悬液5分钟,弃掉上清。 2.3 重复洗涤一次,加满细胞染色buffer(或含1%BSA的PBS)至15mL, 300g离心细胞悬液5分钟,弃掉上清。 2.4 细胞计数,用细胞染色buffer(或含1%BSA的PBS)将细胞制成1x107/mL悬液。将100μL细胞悬液加入2mL EP管中备用。 封闭Fc受体 封闭Fc受体能减少染色过程中的非特异性染色。 小鼠中,纯化的CD16/CD32单抗能和FcγRⅢ/Ⅱ结合,封闭非特异
人外周血单细胞悬液制备流程 1.采集人外周血样本于抗凝管中。 离心管内加入100 μL新鲜血和2 mL 1×红细胞裂解液,混匀,4℃裂解10 min。 300 g离心5 min(裂解完立即离心,防止时间过长损伤细胞),弃上清,得到白色细胞沉淀。 PBS洗涤一次。 加入100 μL细胞染色缓冲液重悬细胞,不用计数,即可进行后续流式抗体染色实验。按照100 μL新鲜血样本制备的单细胞悬液,加入1 Test对应的流式抗体混匀进行后续实验。 注意事项: 1. 采血用抗凝管,有肝素和EDTA两种
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