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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
99
- 细胞类型:
科研
- 物种来源:
鼠/人/其它
- 细胞形态:
上皮样/成纤维样/其它
- 运输方式:
常温运输/干冰运输
- 生长状态:
贴壁/悬浮
- 规格:
25T
细胞常规说明:
培养条件:89%基础培养基+10%FBS+1%双抗
冻存液成分:10%DMSO+40%FBS+50%基础培养液
细胞质检情况:不含细菌、真菌、支原体等微生物污染
传代建议:1:2~1:3传代,2~3天换液1次
特别提醒:签收细胞后,如细胞状态不佳,或培养中遇到问题,烦请当天尽快联系,以便处理。当天及时反馈细胞情况和细胞照片是售后跟踪处理重要的参考依据,请务必重视。
悬浮细胞接收后的操作流程与注意事项
1.如签收时出现培养瓶壁破裂,漏液等情况请及时做好照片记录并联系实验室
2.拧松瓶盖,细胞瓶竖立培养8h(或过夜)
3.待细胞沉底后吸除上层液体(含碎片残渣,请小心操作),然后吸取沉底的细胞层(2ML左右转移到新的培养瓶,加入新鲜的完全培养基(如细胞状态较差可将血清浓度调高到15%)继续培养
悬浮细胞常规培养传代流程(请严格遵照无菌操作)
1.将培养瓶/皿中的细胞重悬混匀
2.吸取2/3或者一半混匀后的细胞悬液到新的培养瓶/皿
3.分别在原瓶/皿和新分瓶的培养瓶/皿加入等量或者2倍的新鲜培养基,使细胞密度保持在5 X10(5) /ml左右
4.注意培养基PH值变化情况和细胞密度,定期半量换液(每周2-3次),待细胞密度大于2 X 10(6) /ml以后重复1项操作或者冻存
贴壁细胞接收后的操作流程与注意事项
1.收到细胞当天尽快更换新鲜完全培养基,第二天再进行消化处理
2.如果细胞收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态,请将悬浮的细胞即时离心,加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶继续培养观察。同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基,培养观察
3.若出现生长不均:贴壁细胞若出现分布不均,成岛状生长,可将细胞进行消化,重悬打散细胞,加入新鲜培养基进行培养
贴壁细胞常规培养传代流程(请严格遵照无菌操作)
1.吸出原培养瓶中的培养基,PBS缓冲液润洗细胞两次,加适量0.25%胰酶进行消化细胞(注意把握消化时间)
2.镜下观察消化情况,在细胞边缘缩小,贴壁松动时(不建议消化到细胞漂浮)去掉胰酶,加6~8ml 完全培养基,轻轻吹打细胞层,尽量把细胞层吹落,吹散
3.取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中,添加适当的完全培养基,把细胞悬液打匀,于培养箱中培养
4.注意培养基PH值变化情况,定期换液(每周2-3次),待细胞密度达到80%以后重复1项作或者冻存
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文献和实验体外培养模型已被广泛应用于血脑屏障的研究、脑血管疾病的病理生理及分子生物学研究、新药筛选、脑微血管内皮细胞生理生化及药理学研究等领域。而大多数体内实验采用大鼠为动物模型,而且大鼠具有较多的细胞生物学研究所需的抗体可用,因此进行大鼠脑微血管内皮细胞的培养具有重要的意义。自从Panula等[2]首次成功培养大鼠脑微血管内皮细胞以来,国内外有关大鼠脑微血管内皮细胞的分离和培养方法已有较多的报道,我们发现国内的方法多以组织匀浆、两次尼龙网过滤分离脑微血管段为主[3,4],也有采用酶消化、梯度离心及尼龙网过滤
实验材料: 1. 正常兔大脑皮质组织; 2. 不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素,pH7.2; 3. M199培养液(含20%小牛血清、肝素25U/ml、HEPES 10mmol/L、100IU/ml青霉素和100μg/ml链霉素);D-Hanks液;0.05%胰蛋白酶溶液;0.05%胶原酶溶液;15%右旋糖苷(用Hanks配制,pH7.4); 4. 匀浆器、手术刀、解剖剪、解剖镊、眼科剪,眼科
V asc B iol, 1995, 15 (7) : 903~ 909. [ 3 ] 钱志远, 黄 强, 周丽英, 等. 鼠脑微血管内皮细胞的分离与长期培养[J ]. 细胞生物学杂志, 1999, 21 (1) : 42~ 45. [ 4 ] 王建民, 施永德, 步燕芳, 等. 大鼠脑血管内皮细胞的分离培养与形态学观察[J ]. 解剖学杂志, 1998, 21 (6) : 495~ 499. [ 5 ] 刘鼎新, 吕证宝. 细胞生物学研究方法与技术[M ]. 北京: 北京医科大学, 中国
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