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- 库存:
99
- 细胞类型:
科研
- 物种来源:
鼠/人/其它
- 细胞形态:
上皮样/成纤维样/其它
- 运输方式:
常温运输/干冰运输
- 生长状态:
贴壁/悬浮
- 规格:
25T
细胞常规说明:
培养条件:89%基础培养基+10%FBS+1%双抗
冻存液成分:10%DMSO+40%FBS+50%基础培养液
细胞质检情况:不含细菌、真菌、支原体等微生物污染
传代建议:1:2~1:3传代,2~3天换液1次
特别提醒:签收细胞后,如细胞状态不佳,或培养中遇到问题,烦请当天尽快联系,以便处理。当天及时反馈细胞情况和细胞照片是售后跟踪处理重要的参考依据,请务必重视。
悬浮细胞接收后的操作流程与注意事项
1.如签收时出现培养瓶壁破裂,漏液等情况请及时做好照片记录并联系实验室
2.拧松瓶盖,细胞瓶竖立培养8h(或过夜)
3.待细胞沉底后吸除上层液体(含碎片残渣,请小心操作),然后吸取沉底的细胞层(2ML左右转移到新的培养瓶,加入新鲜的完全培养基(如细胞状态较差可将血清浓度调高到15%)继续培养
悬浮细胞常规培养传代流程(请严格遵照无菌操作)
1.将培养瓶/皿中的细胞重悬混匀
2.吸取2/3或者一半混匀后的细胞悬液到新的培养瓶/皿
3.分别在原瓶/皿和新分瓶的培养瓶/皿加入等量或者2倍的新鲜培养基,使细胞密度保持在5 X10(5) /ml左右
4.注意培养基PH值变化情况和细胞密度,定期半量换液(每周2-3次),待细胞密度大于2 X 10(6) /ml以后重复1项操作或者冻存
贴壁细胞接收后的操作流程与注意事项
1.收到细胞当天尽快更换新鲜完全培养基,第二天再进行消化处理
2.如果细胞收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态,请将悬浮的细胞即时离心,加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶继续培养观察。同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基,培养观察
3.若出现生长不均:贴壁细胞若出现分布不均,成岛状生长,可将细胞进行消化,重悬打散细胞,加入新鲜培养基进行培养
贴壁细胞常规培养传代流程(请严格遵照无菌操作)
1.吸出原培养瓶中的培养基,PBS缓冲液润洗细胞两次,加适量0.25%胰酶进行消化细胞(注意把握消化时间)
2.镜下观察消化情况,在细胞边缘缩小,贴壁松动时(不建议消化到细胞漂浮)去掉胰酶,加6~8ml 完全培养基,轻轻吹打细胞层,尽量把细胞层吹落,吹散
3.取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中,添加适当的完全培养基,把细胞悬液打匀,于培养箱中培养
4.注意培养基PH值变化情况,定期换液(每周2-3次),待细胞密度达到80%以后重复1项作或者冻存
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文献和实验-Rad)。将树脂置于水中,40g/L,pH约为7.4,放置滤纸于漏斗上,过滤树脂。加入树脂于FCS中,搅拌60min。接着过滤使血清变得清亮,再用0.45ug滤纸除菌。后者过滤过程较慢。需用购买的商品化滤器。完全培养液中钙离子浓度约为0.09mmol/L,与0.15mmol/L钙浓度相比这是普通培养液。 注意事项 小鼠角质细胞在低钙中维持至1周时间,尽管细胞活力有所降低。可通过商业途径如Clonetics和GIBCO/BRL获得书中低钙、无血清培养液培养角质细胞
北大伊成器团队 Nature Method 发文,揭示单碱基编辑脱靶风险!
除了通过 sgRNA 推测出来的结合位点(putative sgRNA binding sites,sPBS)上发生的脱靶效应,研究团队还发现了更加令人惊讶的现象。那就是 CBE 的脱靶效应,还能发生在 sPBS 之外,这些编辑位点甚至可能离 sPBS 距离数个甚至数百个碱基。同时 CBE 所依赖的 Cas9 进行编辑需要原间隔序列临近基序(protospacer adjacentmotif,PAM)的存在,可该文作者发现,CBE 还造成了大量间隔序列外(out-of-protospacer)的脱靶编辑。 除此
。一般地,基因特异的 sgRNA 模板序列为位于 PAM 序列(Protospacer Adjacent Motif)前间区序列邻近基序。这是一种见于 crRNA 分子的短核苷酸基序,可以被 Cas9 蛋白特异性识别并切割的 20 个 nt。 而 PAM 序列的特征为 NGG(其中 N 为任意核苷酸)01 找敲除目的基因的外显子根据目的基因选择待敲除靶基因位点找出敲除目的基因的外显子。 首先在第一个起始密码子 ATG 之后的外显子中找出特异性高的上下游序列。以小鼠基因 Th 为例。在 pubmed
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