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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
默瑞生物
- 现货状态:
现货
- 规格:
压平宽度24mm,直径16mm,单位长度体积1.8 ml/cm
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文献和实验pH8.0PBS、1%硫柳汞、离心机及离心管、烧杯(25ml)搅拌器、无菌吸管,无菌吸管及毛细滴管、烧杯(500ml)透析袋等。(2)方法及步骤①抗体准备 用o~4~C的pH8。0磷酸盐缓冲盐水将球蛋白溶液稀释至浓度为30~40mg/ml,置入25ml烧杯内,放于冰槽中。②荧光色素准备 按每毫克免疫球蛋白加入荧光素0.01rug计算,称取所需的荧光素,用3%碳酸钠水溶液溶解。③将准备的抗体与荧光色素溶液等量混合,充分搅匀,在o~4~C冰箱中结合(最好在磁力搅拌机上持续搅拌)18~24h。④透析
将包涵体悬浮在下述溶液中,4℃振荡过夜。 100mM Tris 50mM Glycine 8.5M 尿素 溶液用HCl调节到pH 8.0后加入 25mM DTT 6000RPM离心,取上清,去除不溶解物。 包涵体蛋白的复性 将溶解的包涵体装入透析袋,在4℃下将透析袋浸入下列溶液依次透析: 0.1M Tris 0.4M L-Arginine 1 mM EDTA 0.2mM PMSF 4M 尿素 溶液pH调节到8.0 透析24小时 0.1M Tris
铵溶液,边滴加边摇匀,然后置于2到8摄氏度静置2小时。 将步骤e中的待分离物于离心机内离心,8000r/min离心15到20分钟,除上清。 将步骤f中离心后的沉淀用1ml 0.01M PBS 溶解, 转移到MD 14000透析袋内,用0.01 M PBS进行透析,透析4次以上,每次至少1小时以上。 2.正辛酸-饱和硫酸铵沉淀法该纯化方法原理是:正辛酸在偏酸条件下,能与抗血清中或者小鼠腹水中的杂蛋白结合,在等电点附近将其沉淀,IgG类抗体则存在于上清液中,再利用饱和硫酸铵沉淀法即可进一步提纯。 具体
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