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上海远慕生物
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100 ml (10 blots, 100 cm2)
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文献和实验Western blotting using ECL reagent
membrane (Amersham Life Science; cat # RPN2020D)Kodak X-OMAT (XAR-5, 18X24 cm; cat # 8532665)10X TBS12.11 g Tris-base (100 mM)87.66 g NaCl (1500 mM)1 liter dd H2OAdjust pH= 7.6Washing buffer (TBS-T): 100 ml 10X TBS + 900 ml dd H2O + 1 ml Tween-20.Blocking
off with 0.05% Tween 20 in PBS. 7. Block for about 1 hr with 5% BSA/Tween 20, or overnight with 3% BSA/Tween 20. Reagents and Buffers for Westerns Reagent 30% acrylamide/bisacrylamide (29:1 mix) 100ml(dark bottle at 4°C) 29g acrlamid 1g bisacrylamid
样本准备 蛋白提取 所需仪器:匀浆器、RIPA 裂解液、PMSF(蛋白酶抑制剂)、磷酸酶抑制剂、剪刀、镊子,消毒酒精棉、PBS、移液器、离心机。 裂解液配制——RIPA 裂解液:PMSF=100:1。 1) 组织处理:首先用酒精棉消毒剪刀和镊子,取适量的组织于匀浆器中,用剪刀剪碎加适量的裂解液冰水中匀浆 1-4 min。匀浆结束后吸取溶液于 EP 管中保存备用。(含血液较多的组织可先用 PBS 清洗后再匀浆) 2) 细胞处理: A、 贴壁细胞处理:去掉培养基用 PBS 清洗后加入适量的裂解
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