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10
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上海远慕生物
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500 U @ 5 U/μl
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文献和实验)1.5 μL,LATaq DNA 聚合酶(5 U/μL)1.5 U,dd H2O 补足 25 μL。将首轮扩增产物以 TE 缓冲液(pH 8.0)稀释 10 倍作为 Nested PCR 的模板。扩增程序:94 ℃ 25 s,72 ℃ 4 min,7 个循环;94 ℃ 25 s,67 ℃ 4 min,32 个循环;67 ℃ 7 min,4 ℃ 保存。方法二 TAIL-PCR 技术1 基因组 DNA 提取(同上)2 TAIL-PCR 引物设计根据已知的基因组 DNA 片段序列,以待扩增的 5' 末端
细胞系U937,细胞密度2×108/L,分对照组(N)、处理Ⅰ组(T1)、处理Ⅱ组(T 2),N用1640培养基及10%胎牛血清培养,T1用IFN-γ104U/L LPS 1μg/L、T2用IFN- γ10 U/L LPS l0μg/L分别刺激7h.1.2 主要试剂与仪器TRIzol试剂(GIBCO BRL)、Fluoro DD试剂盒(Genomyx)、Supersript Ⅱ逆转录酶(GIBCO BRL)、Ampli Taq DNA聚合酶(GIBCO BRL)、RNase-free DNaseI
2 仪器、用具 PCR仪、0.2ml PCR管、移液器 3 试剂 (1)RNase Free H 2 O;10×RT PCR Bμffer (含dNTP Mixture);RNase Inhibitor(40U/μl);AMV Reverse Transcriptase XL (5U/μl);RNase H (60U/μl);5×Hybrid RNA Degradation Buffer;5×RNA (ssDNA)Ligation Buffer;T
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