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Klenow Fragment,Exo-
629
北京百奥莱博科技有限公司
100U
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域,致力于为客户提供包括Klenow片段(无外切酶活性)促销在内的一系列分子生物学试剂产品,并提供一系列相关的技术服务。
名称:Klenow片段(无外切酶活性)
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
英文名:Klenow Fragment,Exo-
规格:100U
编号:YT510
本酶是没有外切酶活性的Klenow片段,是大肠杆菌聚合酶I(E.coli.DNA polymerase I)的大片段(Large Fragment)缺失了外切酶活性的突变体。Klenow Fragment,Exo-保留了DNA聚合酶I的5"→3"聚合酶活性,但缺少完整的Klenow酶的5"→3"和3"→5"外切酶活性。
特点:由于Klenow Fragment,Exo-没有外切酶活性,其在末端补平时经常会在3"末端额外加上1个或多个核苷酸,因此不能用于产生平末端而用于后续的连接。
用途:5"突出末端的标记;随机引物法进行DNA标记;Sanger双脱氧法进行DNA测序等。
来源:由大肠杆菌表达,表达基因的来源为突变的 polA 基因片段。
分子量:约68kDa(单体)。
活性定义:37℃30分钟内,催化10nmol脱氧核糖核苷酸(dNTPs)摻入到多聚核苷酸中所需的酶量定义为1个活性单位。
酶活性检测条件:67mM potassium phosphate(pH7.4),6.7mM MgCl2,1mM 2-mercaptoethanol,0.033mM dATP,0.033mM dTTP,0.4MBq/ml[3H]-dTTP,62.5μg/ml poly(dA-dT)·poly(dA-dT)。
纯度:不含DNA内切酶,不含RNase。
酶储存溶液:25mM Tris-HCl(pH7.5),0.1mM EDTA,1mM DTT,50%(v/v)glycerol。
Reaction Buffer(10X):500mM Tris-HCl(pH8.0 at 25℃),50mM MgCl2, 10mM DTT。
失活或抑制:75℃加热10分钟或加入适量EDTA均可导致Klenow Fragment,Exo-失活。金属离子螯合剂,无机焦磷酸盐(PPi),大剂量的无机磷酸盐(Pi)均对Klenow Fragment,Exo-有抑制作用。
储存条件:-20℃。
使用说明:
1. 随机引物法进行DNA标记:
a. 参考如下表格设置反应体系:
DNA———————————————————————————————10µl(100ng)
Reaction Buffer (10X)——————————————————————5µl
125µM random decamer or hexamer primer——————————————10µl
补充无核酸酶的去离子水——————————————————————至40μl
混匀后沸水浴孵育5-10分钟,立即置于冰浴冷却。进行后续步骤前离心沉淀液
3 dNTP Mixture (0.25mM each , without the labeled—————————4μl
[α-32P]-dNTP, ~110 TBq/mmol (3000Ci/mmol)————————————1.85MBq (50μCi)
Klenow Fragment,Exo-———————————————————————1µl (5U)
补充无核酸酶的去离子水———————————————————————至50µl
b. 按上表设置好反应体系后,轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在最低速度轻轻混匀),随后离心沉淀液体。
c. 对于random decamer primer,37℃孵育5分钟;对于random hexamer primer,37℃孵育10分钟。
d. 加入4μl 0.25mM dNTP,混匀后37℃孵育5分钟。
e. 加入1μl 0.5M EDTA,pH8.0终止反应。
f. 取1μl上述液体用于检测标记的效率。
g. 用Sephadex G-50或Bio-Gel P-60或其它适当试剂盒纯化标记好的探针。
2. 双链DNA 5’突出(5’ overhang)末端的标记:
a. 参考如下表格设置反应体系:
Digested DNA ——————————————————————————10~15µl(0.1~4μg)
Reaction Buffer (10X)——————————————————————2µl
[α-32P]-dNTP, ~15-30 TBq/mmol(400-800Ci/mmol) —————————0.74 MBq(20μCi)
或 [α-32P]-dNTP, ~110 TBq/mmol(3000Ci/mmol)———————————2.96 MBq(80μCi)
3 dNTP Mixture (2.5mM each , without the labeled)————————2μl
Klenow Fragment,Exo-———————————————————————0.2μl (1U)
补充无核酸酶的去离子水———————————————————————至20µl
b. 按上述体系配好之后,轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在最低速度轻轻混匀),随后离心沉淀液体。
c. 30℃孵育15分钟。
d. 75℃孵育10分钟终止反应。
3. 其他用途可以参考上述用途或适当的文献资料进行。
关键词:Klenow片段(无外切酶活性),YT510,Klenow Fragment,Exo-
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YT382 | PCR Master Mix (含蓝色电泳染料) |
YT209 | C/EBP凝胶迁移探针(10μM) |
YT877 | 封闭液(10X浓缩,不含去垢剂) |
YT033 | 细菌冻存液(细菌保存液) |
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