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文献和实验基因编辑再次升级！领域大牛刘如谦 Cell 发文开发新工具，可安全高效进行体内基因编辑
293T 细胞。 图片来源：Cell VLP 的持续改善以优化其递送性能 虽然上述实验证明了 v1 BE-VLPs 可以在体外细胞系中实现高效递送和精准编辑，但这些常用的测试细胞系尤其容易被基因编辑，并且缺乏治疗相关性。考虑到只有在病毒颗粒成熟后才会发挥切割功能并释放出 ABE8e-RNP。所以他们认为切割效率可能会成为 BE-VLP 编辑的瓶颈。 在第二代工程编辑的 BE-eVLPs（v2 BE-eVLPs）中，他们对连接肽体系进行了优化。研究人员筛选了 4 个已知被 MMLV 蛋白酶以不同效率切割
新设计引物，比如 Primer Premier 5、NCBI Primer-BLAST、OligoCalc 等； ③调整 PCR 反应体系，PCR 酶失活或性能较差、Mg2+等组分浓度过高或过低都可能导致扩增失败，尤其是面对复杂片。建议选择高性能的 PCR 酶，提高 PCR 实验成功率。QIAGEN 的 AllTaq 系列所用的 Taq DNA 聚合酶利用小分子锁扣（Guard molecular）原理，大大提高片段扩增的灵敏度及特异性； ④调整 PCR 程序，退火温度过高、延伸时间过短、循环数过少都会导致扩增出现问题
minutes). Then put on ice4. Make the probe, using the TnT (Promega) Reticμlocyte Lysate kit.Set up either a 25 μl reaction or a 50 μl reaction, depending on the size of tray you'll be using for washes and probing. Below is the recipe for a 50 μl reaction
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