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四步致胜奇招 高效克隆你值得拥有（下篇）

上篇我们对经典分子克隆技术和无缝组装克隆技术进行了比较，经典分子克隆兜兜转转、如琢如磨，而无缝组装克隆技术却能做到操作简单和方便快捷。那它究竟是如何实现的呢？本期我们就来具体聊聊无缝克隆的四步致胜奇招。 无缝组装克隆之 Step 123——带你飞，把还在用传统方法“琢磨”的他甩在后面 基于同源序列的无缝组装克隆技术，关键是利用 PCR 引物，在目标片段两端引入与线性化载体两端同源的一段序列。基本策略是 选定插入外源片段的位置，以此线性化载体 设计包含线性化载体两端序列和目标片段两端序列的引物

Pyrosequencing原理概述

Pyrosequencing是对短到中等长度的DNA序列样品进行高通量的、精确和重复性好的分析的技术。第一步——测序引物和PCR扩增的、单链的DNA模板杂交，与酶—DNA聚合酶（DNA polymerase）、ATP硫酸化酶（ATP sulfurylase）、荧光素酶（luciferase）、三磷酸腺苷双磷酸酶（apyrase）—和底物—adenosine 5´ phosphosulfate (APS)、荧光素（luciferin）孵育。第二步——四种dNTP（dATPS，dTTP，dCTP

QIAgenes 预制蛋白表达载体

QIAgene Expression Kit——再也不为重组蛋白的表达效率发愁 据Protein Database的最新数据表明，目前已知的人类蛋白有35,000种(包括splice variants)，大约33%的蛋白正处于研究中，但是只有8%的蛋白能够成功表达。统计数据同时显示，目前克隆，表达，纯化的成功率只维持在54%，74%，59%。所以说，在蛋白表达的漫漫征途中，拿不到想要的蛋白是一件非常普遍的事情。举一个例子来说对于目标蛋白不表达或表达量低这个常见问题，需要排除或检查的因素就太多