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汉恒生物
Raw264.7转染、慢病毒感染后容易分化?
汉恒生物为解决这些烦恼而研发了专属特效病毒!
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还可索取细胞培养跟病毒感染技术资料
产品简介
1.悬浮细胞专用
汉恒生物开发的悬浮细胞专用腺病毒针对悬浮细胞的细胞膜特性进行了腺病毒的改造,病毒感染体系也进行了相应的优化,极大改善对悬浮细胞的感染能力。对贴壁细胞的感染能力无影响,可以通用。
2.超强感染效率
汉恒悬浮细胞专用腺病毒对Jurkat、K562等众多悬浮培养细胞系感染效率接近100%,对血液来源原代细胞,如CD4+ T细胞感染效率可达60%以上。
腺病毒的细胞感染特性
1)腺病毒不插入细胞基因组,不形成稳定转染;
2)腺病毒的瞬时表达能力一般为2-4周,细胞增殖越快,表达时间越短;
3)由于不会随机插入损伤基因组,相比较慢病毒,腺病毒对体外培养的目的细胞毒性较小,因此可以用较高MOI来感染目的细胞。
4)高滴度:汉恒生物提供的腺病毒产品滴度较高,由于采用了汉恒特有的体系,用于细胞感染级别的腺病毒一般可以达到1010 PFU/ml滴度。
腺病毒细胞实验策略
由于腺病毒的非稳转性、低离体细胞毒性以及高滴度,应用腺病毒感染细胞的一般策略是:先扩增足量的目的细胞,然后用腺病毒载体感染目的细胞,待目的基因表达后直接进行后续的细胞功能性实验。一般不会用腺病毒先感染细胞后再对细胞进行二次扩增放大化培养。
悬浮细胞专用腺病毒感染实验相关知识点
1)悬浮细胞准备:腺病毒建稳转细胞系前,请确保目的细胞状态良好、无支原体污染。腺病毒感染的时候细胞汇合率为40%~60%间为宜。
2)感染细胞最佳MOI的测定:MOI(感染复数)是指每个细胞感染的病毒数。
腺病毒对于不同种类不同来源的细胞,其最适MOI各有差别。对于悬浮细胞,腺病毒MOI一般以30, 100, 300, 1000, 2000的比例递增进行梯度摸索,相比于贴壁细胞,悬浮细胞的腺病毒MOI需求更高,MOI梯度摸索建议用96孔板进行以节省病毒和细胞。
3)MOI对应病毒体积的换算(非常重要!)
感染时细胞数(一般以传代计数细胞数×2计算)×MOI=病毒个数;则加入的病毒体积数=病毒个数/病毒滴度。
比如第一天传代1×104细胞到96孔板一个孔,第二天长到2×104细胞,按照MOI=500计算,需加入病毒总量为2×104×500=1×107个病毒粒子,按照腺病毒1×1010 PFU/ml的滴度,则加入的病毒体积数为(1×107)/(1×1010 PFU/ml)=1×10-3 ml=1 μl。
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邮箱:sales@hanbio.net
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文献和实验对于此汉恒生物专门研发了对人、小鼠等物种的原代 T 细胞均具有很高感染效率的病毒:汉恒生物小鼠 T 细胞专用逆转录病毒 mTRv 或人 T 细胞专用慢病毒 hTLv,以及对两种 T 细胞效果都比较好的汉恒生物悬浮细胞专用腺病毒 ADS。 原代 T 细胞感染前,需要先进行 CD3/CD28 抗体和 IL-2 刺激激活 48h,再离心换新鲜 T 细胞完全培养基,进行病毒感染。原代 T 细胞为悬浮细胞,需要通过平角离心转染法,先重悬细胞,然后将适量的病毒液加入细胞培养皿后,封好口,放入平角离心机,1000
(图4),纤突蛋白先与细胞膜表面的嵌合抗原受体(CAR)结合,接着五邻体蛋白与细胞膜上的整合素αVβ相互作用,通过内吞作用将腺病毒转移到胞内。根据纤突蛋白的不同,汉恒生物不仅能提供常规的Ad5,还拥有自主研发的改良型腺病毒载体—Ads,它能高效感染悬浮细胞、专用于原代T细胞。 图4 腺病毒感染细胞过程 表2 腺病毒产品比较 总之,细胞实验和动物实验都可以用腺病毒,可见其在科研领域适用范围之广。汉恒生物的腺病毒产品成功助力许多生物医学研究人员发表相关文献,下面我们通过一些汉恒生物
相关专题 RNA干扰技术 北京英茂盛业生物科技有限公司专业从事分子 生物学技术服务 。我们提供从基因的合成、获取、表达载体 构建、蛋白表达 到基因RNA干扰,以及稳定细胞系筛选。其中慢病毒 包装、RNA干扰和稳定细胞株筛选已经形成一套成熟的体系。公司的成员均为硕士和博士,有着多年专业分子 生物学技术实践经验,已经成功为中科院 、北京大学等知名研究院所和多家制药企业提供技术服务 。 北京英茂盛业致力于新
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