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- 保存条件:
蛋白酶抑制剂-20℃保存;其他组分保存条件请参阅产品
- 保质期:
一年
- 英文名:
Bestbio
- 库存:
大量
- 供应商:
贝博生物
- 规格:
50T
贝博生物拥有一支技术力量雄厚的研发团队,包括蛋白质研究、细胞生物学、免疫学等方向的产品研究开发。贝博生物建立了高标准的质检系统,产品从原料、半成品、成品入库到销售之前,每一个环节都有严格的质检标准,并以标准的生产工艺,保证产品质量的稳定性。
贝博植物核蛋白和细胞器蛋白提取试剂盒提供全套试剂,适用于从各种植物细胞和各种实体植物组织,如叶片、根、种子等植物组织中提取核蛋白和其它细胞器蛋白。提取过程简单方便,可在1小时内完成。制备的核蛋白不仅纯度高,保持天然活性,而且绝少交叉污染。提取的蛋白可用于Western Blotting、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。
使用方法:
使用注意事项:
- 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
- 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
- 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
- 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
-
- 提取液制备:每500ul预冷的蛋白提取液A中加入2ul蛋白酶抑制剂;每200ul蛋白提取液B和C中分别加入1ul蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
- 取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的200mg植物组织样本剪碎,采用以下一种方法处理:
- 加入500ul提取液A后用匀浆机/匀浆器匀浆。
- 置于研钵中用液氮研磨,研磨后加入500μl冷的提取液 A。
- 加入500ul提取液A直接置冰上研磨。
- 高速涡旋振荡5秒,然后在4℃,100×g力条件下离心1分钟。
- 收集上清,弃沉淀。
- 将上清在4℃,600×g力条件下离心1分钟。
- 收集沉淀,将上清移入另一干净的离心管。
- 在沉淀中加入100-200μl冷的提取液B,高速涡旋振荡15秒。
- 置冰上40分钟,每隔10分钟高速涡旋振荡15秒。
- 在4℃,16000×g条件下离心10分钟。
- 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,即得到核蛋白。
-
- 将步骤6中的上清在4℃,12000×g条件下离心10分钟。
- 弃上清,收集沉淀。
- 在沉淀中加入100-200μl冷的提取液C,高速涡旋振荡15秒。
- 置冰上40分钟,每隔10分钟高速涡旋振荡15秒。
- 在4℃,16000×g条件下离心10分钟。
- 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即得到细胞器蛋白。
- 将上述蛋白提取物定量①后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验②。
① 建议用BCA法进行蛋白定量。
② 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉,不要被细菌污染。
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文献和实验【求助】求助!!关于EMSA核蛋白提取过程中用到的100x Protease Inhibitor
要购买,而分别购买这些试剂的钱加起来可以买个核蛋白提取试剂盒了很不划算。有没有做EMSA的人啊,你们提核蛋白的Protease Inhibitor都怎么来的? 有人用过上海生工的核蛋白提取试剂盒了,那个只要250元,提出来的效果怎么样? xhjggl 效果比较好,他们也有100x Protease Inhibitor卖 ,打折卖100x1ml 525元 月下独见 谢谢LS,这样看直接买核蛋白提取试剂盒还划算
,细胞膜组分等。 3. 根据实验目的,目标蛋白分子量及蛋白定位,设计合理的对照及上样顺序,并选择合适的内参,确认上样量。 例如:验证目标蛋白在胞质胞核中易位的情况,首先将样品进行胞质和胞核蛋白分离,可设定总蛋白为对照组,胞质与胞核蛋白样品应同时上样到一块胶中保证 WB 所有条件一致,才可说明蛋白表达量的差异和趋势,若在不同胶中,孵育曝光等条件无法统一,得出的结论会导致偏差。 内参选择的方向可以考虑以下四点: 1)确认样本种属来源:是哺乳动物还是植物还是其他 2)分子
owen79 哦了,感谢啊! xhjggl 可以使用上海生工的以下产品来提取核和胞质蛋白 zhangqiang6612 我用的是碧云天的核蛋白提取试剂盒,6孔板的细胞,长到80%,每个孔所提的核蛋白基本都有条带的 本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴 师兄微信号:shixiongcoming











