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- 2025年07月14日
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文献和实验核蛋白提取 实验准备： 1 4℃离心机 2 根据标本数计算所需I，II，III，IV总体积，取出液体，并加入蛋白酶抑制剂，（III由加蛋白酶抑制剂I与加蛋白酶抑制剂II混合物） 实验操作： 1 收集细胞。10ml 对照细胞（1-2*105/ml ）培养48h后，15ml 离心管收集，300g（1370 rpm）* 5min。弃上清，加1ml 1*PBS轻轻涡旋混匀后转移至1.5ml EP管。 2 4℃，300g * 5min，弃上清。 3 重悬
它的蛋白溶液可以冻存)与Zwittergent 等双性离子去垢剂； ③还原剂：DTT、DTE、TBP、Tris-base 等；④蛋白酶抑制剂及核酸酶：EDTA、PMSF、蛋白酶抑制剂混合物(Protease inhibitor cocktails)等，如为了去除缓冲液中存在的痕量重金属离子，可在其中加入0.1～5mmol/LEDTA，同时使金属蛋白酶失活。 三、 仪器和试剂 仪器 离心机、移液器、研钵、离心管、冰箱。 试剂 1. 20mL 样品提取缓冲液：2.5mL
X 蛋白酶抑制剂混合物 PIC＃7012 和 10X 甘氨酸溶液＃7005，直到完全溶解。配制 ChIP 样品制备所需要的各种试剂：包括：缓冲液 A（主要是对细胞膜进行裂解，同时对核膜进行打孔，以便于后续微球菌核酸酶进入核内发挥酶解作用）：我们按照实验设计，需要配 3 倍反应需要的体积，同时加入合适的 DTT 和 200X 蛋白酶抑制剂混合物（PIC），在冰上预冷。按照说明书的描述，每 4X 106 细胞，准备 1 ml 1X 缓冲液 A（250 ul 4X 缓冲液 A #7006+750ul 水
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