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- 2025年07月15日
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贝博生物
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100T
蛋白检测
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文献和实验。6）滴加正常山羊血清封闭液，室温20分钟。甩去多余液体。7）滴加 Ⅰ 抗,室温1小时或者4℃过夜或者37℃1小时（4℃过夜后在37℃复温45分钟）。8）PBS洗三次每次2分钟。9）滴加生物素化二抗,20℃～37℃ 20 分钟。10）PBC 洗 3 次每次 2 分钟。11）滴加试剂SABC，20℃～37℃ 20 分钟。12）PBS 洗 4 次每次 5 分钟。13）DAB 显色：DAB 显色试剂盒或者自配显色剂显色（镜下掌握显色程度）。14）蒸馏水洗。苏木素复染 2 分钟、盐酸酒精分化。15）脱水、透明
或细胞中目的抗原表达水平低：可延长DAB显色时间或延长二抗孵育时间。 （3）试剂超过有效使用期：及时更换试剂。 （4）操作中，滴加试剂时缓冲液未沥干，致使试剂稀释：可每步滴加试剂前沥干切片中多余的缓冲液（但防止切片干燥）。 （5） 蛋白封闭过度：封闭时间不要超过 2h。 Q3：为什么出现高背景染色，怎么办？ （1）一抗浓度过高：对抗体进行滴定以确定获得特异性反应的最佳浓度。 （2）显色过度：缩短显色试剂 DAB 孵育时间。 （3）洗涤不充分：适当增加抗体孵育后的浸洗次数和延长浸洗时间。 （4）封闭
3A7)XP® Rabbit mAb#9145 检测 p-Stat3 的表达，使用不同的产品进行显色。与竞争者的 DAB 产生的信号相比，SignalStain® DABSubstrateKit 的显色强度更佳。CST 对实验细节进行了步步优化，抗体说明书也是为实验成功保驾护航的必备指南：注：使用 PLK1(208 G4)Rabbit mAb #4513 检测人结肠肿瘤中 PLK1 的表达，在经过辅助试剂的步步优化后发现，使用一抗稀释液#8112 稀释抗体，聚合物型二抗#8114 进行检测，DAB 显色试剂
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