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- BB-4108
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
2-8℃
- 保质期：
一年
- 库存：
大量
- 供应商：
贝博生物
- 规格：
20T/50T/100 T
| 规格： | 20T | 产品价格： | ￥600.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 50T | 产品价格： | ￥1200.0 |
| 规格： | 100 T | 产品价格： | ￥2200.0 |
贝博® BBcellProbe® Caspase 9 活性检测试剂盒(Caspase 9 Activity Assay Kit)是采用分光光度法检测细胞或组织裂解液中Caspase 9酶活性或纯化的Caspase 9酶活性的试剂盒。 贝博® BBcellProbe® Caspase 9 活性检测试剂盒是基于casepase 9可以催化Caspase-9底物产生黄色的pNA，pNA在405nm附近有强吸收，从而可以通过测定吸光度来检测caspase 9的活性。 Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)是一个在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。线粒体释放细胞色素c以后，caspase 9可以和细胞色素c以及Apaf1形成复合物，同时被激活。激活的caspase 9可以激活细胞凋亡的最关键酶caspase 3，从而促进后续的细胞凋亡信号。Caspase 9的激活可以通过磷酸化进行调控。 本试剂盒用酶标仪检测或容量不超过100μl的分光光度检测杯检测，可用于培养细胞或新鲜组织样本的caspase-9检测。 贝博® BBcellProbe® 还可以提供荧光标记的Caspase-9 活性检测试剂盒（相关产品BB-41082）。荧光法检测的灵敏度远高于分光光度法，有荧光检测条件者尽可能选择荧光法的检测试剂盒。没有荧光检测条件，可以选择贝博的比色法Caspase-9活性检测试剂盒，需要确保样品中Caspase-9活化程度足够高。
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文献和实验一、 裂解缓冲液和检测缓冲液配制
根据待测样品数准备裂解缓冲液和检测缓冲液，每1ml缓冲液中加入10ul DTT。
充分混匀置冰上备用。
二、 样品处理
A． 细胞样品
1. 收集2-5×106个细胞，在4℃，500×g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 在细胞中加入50μl冷的裂解缓冲液，高速涡旋振荡15秒。
4. 置2-8℃持续振荡15-30分钟。
5. 在4℃，12000×g条件下离心15分钟。
6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
B． 组织样品
1. 取适量组织样本，用手术剪刀尽可能剪碎。
2. 按照50mg/100μl加入冷的裂解缓冲液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。
3. 在2-8℃振荡15-30分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
4. 在4℃，12000×g条件下离心5分钟。
5. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上保存备用。
三、 对上述处理过的上清进行蛋白定量。
四、 Caspase 9活性检测
1. 取50ul大约含100-200ug蛋白的裂解上清，加入40ul检测缓冲液。
2. 再加入10ul caspase-9底物，充分混匀。在37℃下避光反应1-4小时，有黄色颜色产生即可进行检测，如果颜色变化不明显，时间可以延长，甚至孵育过夜。部分样品中激活的caspase-9水平较低，颜色变化不明显，直接上机检测，与对照组样品产品变化即可。
3. 测定A405nm或A400nm。
4. 根据凋亡诱导的细胞的吸光值与空白对照细胞的吸光值的比值计算相对的Caspase 9活性程度。
Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用，其中caspase-3为关键的执行分子，它在凋亡信号传导的许多途径中发挥功能。Caspase-3正常以酶原（32KD）的形式存在于胞浆中，在凋亡的早期阶段，它被激活，活化的Caspase-3由两个大亚基（17KD）和两个小亚基（12KD）组成，裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。但在细胞凋亡的晚期和死亡细胞，caspase-3的活性明显下降。1、Western blot 分析Procaspase-3的活化，以及活化
Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用，其中caspase-3为关键的执行分子，它在凋亡信号传导的许多途径中发挥功能。Caspase-3正常以酶原（32KD）的形式存在于胞浆中，在凋亡的早期阶段，它被激活，活化的Caspase-3由两个大亚基（17KD）和两个小亚基（12KD）组成，裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。但在细胞凋亡的晚期和死亡细胞，caspase-3的活性明显下降。1 Western blot 分析Procaspase-3的活化，以及活化
一、检测原理 Caspase (Cysteine-requiring Aspartate Protease)是在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中，没有活性；在细胞发生凋亡阶段，Caspase被激活，活化的Caspase可裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。 Caspase分光光度法检测试剂盒的原理是将Caspase序列特异性的多肽偶联至黄色发光基团pNA (p-nitroaniline)。当该底物被活化的Caspase剪切后，黄色
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