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文献和实验结合。为防止蛋白质与胶体金的聚合与沉淀,常用牛血清白蛋白,卵白蛋白,聚乙二醇或明胶作稳定剂。用Sephacryb S—400 (丙烯葡聚糖S—400 )层析分离纯化胶体金蛋白标记物只适用于以BSA作稳定剂者。一、待标记蛋白质的准备(1)透析除盐:蛋白质溶液内应除去多余的电解质,不然过高的盐类物质会降低胶体金颗粒的Zeta电位,影响蛋白质的吸附,因此,标记之前必须彻底除盐。一般将蛋白质置入透析袋中然后直接放入双蒸水或极低浓度的盐水(0.005mol/L NaCl , pH7.0)透析。(2)去除蛋白质中的
•如只运行一块凝胶,则需要把胶门(很厚的玻璃板)插入到电极空着的一边。将SDS-PAGE电泳缓冲液倒入凝胶三明治夹与胶门之间,直到缓冲液表面距离玻璃板上缘1cm(图 11)。检查是否有渗漏。将1升的SDS-PAGE电泳缓冲液倒入槽内凝胶组件的周围。 样品制备和装载: •将试管插入至制冷恒温金属浴(4℃),以解冻冷冻牛血清白蛋白(BSA)(1 mg/ml)样品。 然后,加入25μl 4X蛋白染料及75 μl的已解冻牛血清白蛋白溶液。 •把样品加样到凝胶中前, 请在恒温金属浴中以
如何选择合适的牛血清白蛋白(BSA)? 由于牛血清白蛋白(BSA)具有多种产品样式,可满足不同种的应用。目前网上的信息大多模棱两可,有牛血清白蛋白,也有牛血清白蛋白v组分等,很多 供货商对其区别也是不清楚的;另外,市场上还提供无蛋白酶、无DNase及无RNase、无脂肪酸、微生物级、试剂级、诊断分析级等不同等BSA粉末,因 此如何选择合适的BSA产品是很重要的前提。一般来说,普通
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