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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
大量
- 供应商:
上海晶抗生物工程有限公司
- 检测范围:
来电咨询
- 检测方法:
ELISA
- 应用:
科研试剂
- 样本:
来电咨询
- 规格:
96T
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测液态奶、及奶粉样品中的黄曲霉毒素M1(Aflatoxin M1,AFM1)残留量,试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。检测时,加入标准品或样品溶液,样本中的黄曲霉毒素M1和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗黄曲霉毒素M1抗体,加入酶标记物后,用TMB底物显色,样本吸光度值与其所含黄曲霉毒素M1含量成负相关,与标准曲线比较即可得出样本中黄曲霉毒素M1的残留量。
2 技术指标
2.1 试剂盒灵敏度:0.02ppb(ng/ml)
2.2 反应模式:25℃,30min~15min
2.3 检测下限:
液态奶…………………………………0.04ppb
奶粉……………………………………0.06ppb
2.4 交叉反应率:
黄曲霉毒素M1…………………………
2.5 样本回收率:
液态奶…………………………………85%±15%
奶粉……………………………………80±15%
3 试剂盒组成
酶标板……………………………96孔
标准液(黑盖):各1ml
0ppb、0.02ppb、0.06ppb、0.18ppb、0.54ppb、1.62ppb
酶标记物(红盖)…………………5.5ml
抗体工作液(蓝盖)………………5.5ml
底物液A(白盖)……………………6ml
底物液B(黑盖)……………………6ml
终止液(黄盖)………………………6ml
2 X浓缩复溶液(黄盖)……………40ml
20X浓缩洗涤液(白盖)……………40ml
说明书………………………………1份
4 需要的器材和试剂
4.1 仪器:酶标仪、打印机、均质器 、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平(感量0.01g)
4.2 微量移液器:单道20µl-200µl,100µl-1000µl、多道300µl
4.3 试剂:乙腈、纯化水(去离子水)
5 黄曲霉毒素M1检测试剂盒样本前处理
5.1 样本处理前须知:
实验器具必须洁净并使用一次性吸头,以避免污染干扰实验结果。
5.2 配液:
配液1:复溶液:
将2 X浓缩复溶液用去离子水按1:1体积比进行稀释(1份浓缩复溶液+1份去离子水)
配液2:样品提取液配制:
84%乙腈-水溶液(84份乙腈+16份去离子水)。
5.3 样本前处理步骤:
5.3.1液态奶
1)取1ml液态奶于50ml离心管中,加入4ml乙腈,振荡5min, 4000r/min,离心10min;
2)取2.5ml清夜,于50℃下氮气吹干或水浴挥干。加1ml复溶,振荡混匀;
3)取50μl进行分析。
样本稀释倍数:2 检测下限:0.04ppb
5.3.2奶粉
1)称取5.0g奶粉于50ml离心管中,加入20ml样品提取液,振摇5min,过滤或4000r/min,离心10min;
2)取1ml滤液或清夜,于50℃下氮气吹干或水浴挥干。加750ul复溶液,振荡混匀;
3)取50μl进行分析。
样本稀释倍数:3 检测下限:0.06ppb
6 酶联免疫试验步骤
将所需试剂从4℃冷藏环境中取出,置于室温平衡30min以上, 洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解,每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框架,将不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。
实验开始前,用去离子水将20×浓缩洗涤液按20倍稀释成工作洗涤液。
6.1 编 号:将样本和标准品对应微孔按序编号,每个样本和标准品做2孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。
6.2 加样反应:加标准品或样本50µl/孔到各自的微孔中,然后加酶标记物50µl/孔,再加入50µl/孔的抗体工作液,用盖板膜封板,轻轻振荡5秒混匀,25℃反应30分钟。
6.3 洗 涤:小心揭开盖板膜,将孔内液体甩干,用工作洗涤液250µl/孔充分洗涤5次,每次间隔30秒,用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破)。
6.4 显 色:每孔加入底物液A 50µl,再加底物液B 50µl,轻轻振荡5秒混匀,25℃避光显色15分钟。
6.5 终 止:每孔加入终止液50µl,轻轻振荡混匀,终止反应。
6.6 测吸光值:用酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值(建议用双波长450/630nm)。测定应在终止反应后10分钟内完成。
7 结果分析
7.1 百分吸光率的计算
标准液或样本的百分吸光率等于标准液或样本的百分吸光度值的平均值(双孔)除以个标准液(0ppb)的吸光度值,再乘以,即
百分吸光度值(%)=
A
×
A0
A—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb标准溶液的平均吸光度值
7.2 标准曲线的绘制与计算
以标准液百分吸光率为纵坐标,对应的标准液浓度(ppb)的对数为横坐标,绘制标准液的半对数曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中,从标准曲线上读出样本所对应的浓度,乘以其对应的稀释倍数即为样本中待测物的实际浓度。
若利用试剂盒专业分析软件进行计算,更便于大量样本的准确、快速分析。(欢迎来电索取)
8 黄曲霉毒素M1检测试剂盒注意事项
8.1 室温低于25℃或试剂及样本没有回到室温(25℃)会导致所有标准的OD值偏低。
8.2 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况,则会出现标准曲线不成线性,重复性不的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
8.3 混合要均匀,洗板要彻底,在ELISA分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的一致性。
8.4 在所有孵育过程中,用盖板膜封住微孔板,避免光线照射。
8.5 不要使用过了有效期的试剂盒,不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
8.6 显色液若有任何颜色表明变质,应当弃之。0标准的吸光度值小于0.5个单位(A450nm< 0.5 )时,表示试剂可能变质。
8.7 反应终止液有腐蚀性,避免接触皮肤。
9 贮藏及保存期
储藏条件:试剂盒于2-8℃保存,避免冷冻。
保 质 期:该产品有效期为1年,生产日期见包装盒。
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文献和实验近日,蒙牛纯牛奶被检测出强致癌物——黄曲霉毒素M1,消息一出顿时又掀起一股食品安全隐患的讨论。相比之前的三聚氰胺,黄曲霉素是否更难检测? 现整理出全套的专业检测方案,让乳和乳制品中黄曲霉毒素M1无处躲藏。 1. 试用范围 牛奶,奶粉,发酵乳,干酪,奶油等乳制品 2. 方法原理 黄曲霉毒素M1易溶于极性溶剂,因此均匀基质中的黄曲霉毒素M1可以通过甲醇/水震荡分散提取,对于高脂肪/油含量的样品基质加入正己烷予以脱脂。本方法采用免疫亲和柱净化,荧光检测器测定乳制品中黄曲霉毒素
某些黄曲霉和寄生曲霉产生的一种肝毒素。它对动物有极强的毒性和高度的致癌性。目前已分离出B1 、 B2 等 12种衍生物,其中以 B1 的毒性最强。各种黄曲霉毒素的结构相似,都含有 1个糠酸呋喃的基本毒性结构和 1个氧杂萘邻酮结构。纯黄曲霉毒素不溶于水、乙烷、乙醚、石油醚等,而溶于氯仿、甲醇、苯、丙酮等有机溶剂。 1960年英国曾发生震动世界的 10万只火鸡突然死亡的事件,就是因为饲料中有黄曲霉毒素,其中毒症状为食欲不振,走路摇摆,羽翼下垂,昏睡, 1周左右死亡。解剖检查,见肝
曲霉属黄曲霉产生的菌类毒素。 1960年英国在数月内约死掉十万只火鸡,经过研究证实,是由繁殖在花生粗粉饲料中的黄曲霉产生的毒素所致。用紫外线照射黄曲霉毒素,可发出青和绿的四种相类似的荧光物质,为了区别,分别称为 B1 、 B2 、 G1 、 G2 ,并明确了它们的化学结构。它也是引起肝脏病变的致癌物质。由于考虑到黄曲霉是日本酿造品中广泛使用的米曲霉的野生种,因而以曲霉属为中心,对该毒素的生产性进行了广泛的调查,虽有类似的物质,但经过对动物的实验,未能确定其毒性。此外,最初被鉴定
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