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- 文献和实验
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- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
6-12months
- 英文名:
Recombinant Lamin A/C (LMNA)
- 库存:
大量
- 供应商:
泽叶生物
- 规格:
50ug/100ug/1mg
上海泽叶生物科技有限公司是一家集研发、生产和销售于一体的生命科学实验室产品创新性高科技企业。主要从事免疫学,重组蛋白,细胞因子,抗原/多肽/蛋白等产品主要包括免疫调节蛋白、白细胞介素、CSFs、生长因子、干扰素、Chemokines 、Adipokines 、TGFß / BMP Proteins、神经因子、FGFs和TNF配体/受体防御因子等。并代理销售Amresco,qiagen Millipore,eBioscience,Sigma,SANTA,Sciencell,R&D、GBD、ATCC、HYCLONE, CELLutions Biosystems INC , Neuromics , Chemicon, Equitech-bio, Biovision, Promega, Kamiya, Prospec, Cytoskeleton, Novagen, SurModics, Cytelligen LONZA等二十多家国外知名品牌,致力于为广大高校、科研院所和企事业单位提供一流的科研试剂和完善的技术服务。
经甲醛固定的部分组织细胞,因固定过程中可能会形成醛键或羧甲基而封闭部分抗原决定簇,使免疫组化标记敏感性明显降低,因此在染色前,有些抗原需进行修复或暴露。
抗原修复方法可分为化学方法和物理方法。化学方法是以酶消化方法,常用胰蛋白酶及胃蛋白酶,配制浓度与消化时间要适度。常用的物理方法有单纯加热、微波处理和高压加热。在选用这三种方法时,浸泡切片的缓冲液的离子强度和pH、加热的温度和时间均影响着抗原修复效果。
1、pH的应用范围及选择
抗原修复液的pH非常重要,有效的抗原修复pH要比修复液的化学成分更重要,同样的修复液随着pH的升高染色的强度逐渐增强,但最佳pH范围为6.0-10.0。目前大家公认的最好的抗原修复液是pH6.0的柠檬酸盐缓冲液和pH8.0的EDTA缓冲液。作为通用修复液碱性pH的修复液要比酸性的有效,而对固定很长时间旧的存档组织,酸性pH的修复液则优于碱性的修复液。
2、抗原修复时应选择最佳温度
70-90℃的温度对未经固定的蛋白质可发生变性,但经福尔马林固定的蛋白质,温度必须达到92℃以上方能使其变性。研究结果显示,温度为92-98℃是合适的,95℃效果最好。
3、抗原修复液必须遵循自然降温规律,否则效果不好或达不到抗原修复的目的
抗原修复持续时间过后,取出放于室温中让其慢慢地降温,绝对不能为了争取时间,强行用冰块或冷水使其降温。这是因为当高温中的抗原蛋白分子链脱离了其他的束缚或联结,要有一个自然环境让其自然放松下来,随着温度的降低,它们会慢慢地恢复原来的形态和构型。
4、尽量使用足量的抗原修复液
应用于抗原修复的液体,一定要充足,防止切片干涸。应用大量的抗原修复液时,由于它的量较大,可延缓液体的沸腾时间,增加切片受微波辐射的量,对抗原修复将达到彻底。
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文献和实验Nature 解读:David R. Liu 等通过体内碱基编辑实现治疗小鼠Hutchinson-Gilford早衰综合征
Hutchinson-Gilford 早衰综合症(HGPS 或早衰症)通常是由编码核纤层蛋白 A 的基因 LMNA 中 C・G 基因突变为 T・A(c.1824 C> T;p.G608G)引起的。这种突变导致 RNA 错剪,产生早老素(progerin)。早老素是一种有毒蛋白,可引起快速衰老,导致早衰儿童的寿命大约只有 14 岁。尽管治疗早衰的策略例如全面抑制蛋白质法尼基化(farnesylation)可为患者带来益处,但尚没有报道可以直接逆转 HGPS 突变的方法。2021 年 1 月
分子按功能可分为3个部分(见图1):第一部分为信号肽(图1中S),含36个氨基酸,在蛋白质分泌中起作用;第二部分为免疫球蛋白Fc段结合区(图1中E,D,A,B,C),共含291个氨基酸,按顺序分为E、D、A、B、C共 5个结构域,每个结构域都能与Fc段特异结合;第三部分为胞壁结合区(图1中X),含182个氨基酸,与金黄色葡萄球菌胞壁的肽聚糖共价结合。 蛋白A的功能是由其分子中第二部分(E,D,A,B,C)决定的,信号肽第一部分(S)在蛋白的分泌过程中被剪切掉,而约占分子的2/5大小的第三部分(X
因为短的肽标签对目标蛋白的结构影响最小,而大的亲和标签可能限制重组蛋白的折叠,影响蛋白质的生物学功能。(2)亲和标签对蛋白质稳定性的影响,亲和标签的加入是否会影响到目标蛋白的正确折叠,是促进目标蛋白的可溶性,还是容易形成包涵体,会不会造成氨基酸C和N端破坏,使目的蛋白表达不完全。(3)亲和标签所融合的位置,亲和标签可以加在N端,可以加在C端,也进行串联。多数情况下蛋白质的N端区域对蛋白质的功能不是太重要,所以在N端进行融合标签的融合常常能保留蛋白质的生物学功能。由于N端DNA序列对蛋白质的转录
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