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文献和实验者的福音。3. 吸头浸入角度和深度: 吸头浸入角度控制在倾斜20度之内,保持竖直为佳;吸头浸入深度建议如下所示:移液器(移液枪)规格 吸头浸入深度2µl和10µl 1mm20µl和100µl 2~3mm200µl和1000µl 3~6mm5000µl和10ml 6~10mm对常温样品,吸头润洗有助于提高准确性;但是对于高温或低温样品,吸头润洗反而降低操作准确性,请使用者特别注意。4. 吸液速度: 移液操作应保持平顺、合适的吸液速度;过快的吸液速度容易造成样品进入套柄,带来活塞和密封圈的损伤以及样品
1. 使用合适的吸头 为确保更好的准确性和精度,建议移液量在吸头的35%-100%量程范围内。 2. 吸头的安装 对于大多数品牌的移液器,特别是多道移液器,安装吸头并非易事:为追求良好的密封性,需要将移液套柄插入吸头后,左右转动或前后摇动用力上紧。也有人会用移液器反复撞击吸头来上紧,但这样操作会导致吸头变形而影响精度,严重的则会损坏移液器,所以应当避免出现这样的操作。BRAND(德国普兰德)的多道移液器没有O型环,配合有前挡点的吸头,只需轻压一下即可达致理想密封,实在是多道
缓慢滴加 650μl 预热的类器官培养基,确保基质胶被完全覆盖。放于 37℃,5%CO2 的培养箱中培养,每 2-3 天更换培养基(用于换液的类器官培养基内不含 Y27632)。 类器官传代 14、吸出类器官培养液,机械分离 Matrigel,然后加入 500μl 胰蛋白酶,放置于 37℃ 培养箱中孵育 1-2min 后,用移液器多次吹打,从基质胶中释放类器官。 15、用含有 10%FBS 的 DMEM/F12 培养基终止消化,在 4℃ 条件下 300g 离心 5min。 16、用冷 PBS
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