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- 昊鑫生物
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- PC4002
- 2025年07月11日
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- 文献和实验
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充足
- 供应商：
昊鑫生物
- 规格：
1000 次x 20μl 反应体系
常温运输，-20℃长期保存，避免反复冻融。短期使用可放4℃。浓度：
20X 浓缩液 （100µl，1ml）
制品说明：
SYBR Green I与dsDNA 结合荧光信号可增强800～1000倍。在PCR反应体系中，加入过量SYBR Green I荧光染料，它特异性地掺入DNA双链后，荧光信号增强，而不掺入链中的SYBR Green I染料分子荧光不变，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。荧光可以在退火阶段或者延伸阶段测定。 注意事项：
1．使用浓度对荧光PCR结果的影响
SYBR Green I的使用浓度是保证荧光定量PCR实验成功非常关键的因素。如果SYBR Green I的浓度过低会使荧光信号的变化降低，这就意味着低拷贝的样品可能无法检出。而在高浓度时，将会抑制PCR反应，降低PCR反应效率。所以一般在使用SYBR Green I时应根据实际情况优化使用浓度，反应的终浓度为0.2×到1×之间。
2．镁离子浓度的影响
提高镁离子浓度可以降低SYBR Green I对PCR反应的抑制作用。我们建议在用SYBR Green I进行荧光PCR反应时，镁离子浓度比无SYBR Green I 的普通 PCR 反应高出0.5～3mM。 使用方法：将20X SYBR Green I浓缩液加入到PCR反应体系，使终浓度为0.5× （0.2×到1×之间调整）。
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文献和实验可分为荧光探针和荧光染料。荧光探针又包括Beacon技术（分子信标技术，以美国人Tagyi为代表）、 TaqMan探针（以美国ABI公司为代表）和FRET技术（以罗氏公司为代表）等；荧光染料包括饱和荧光染料和非饱和荧光染料，非饱和荧光染料的典型代表就是现在最常用的SYBR GreenⅠ；饱和荧光染料有EvaGreen、LC Green等。 嵌合荧光染料法（SYBR GreenⅠ）SYBR Green I是荧光定量PCR最常用的DNA结合染料，与双链DNA非特异性结合。在游离
PCR过程。（2）SYBR荧光染料法：该方法利用了SYBR Green荧光染料非特异性与双链DNA结合并发光的特性，检测PCR的全部进程，从而判定初始RNA的量。 常用的miRNA第一链合成方法成熟的miRNA大小只有22nt左右，在用实时荧光定量PCR检测miRNA时，难点在于如何识别如此小的miRNA并合成第一链。目前常用的用于识别并合成miRNA第一链的方法主要有颈环法和加尾法两种。（1）颈环法原理图（2）加尾法原理图由于成熟miRNA较小，无法用常规的方法直接进行反转录、PCR
实时荧光定量PCR从1996年美国AppliedBiosystems公司推出实时荧光定量PCR技术以来，该技术已经越来越广泛的应用到各类RNA的研究中，成为研究RNA必不可少的实验手段之一。目前比较常用的方法有两种：（1）TaqMan荧光探针法：该方法在特异性探针的两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。当探针完整时，荧光基团发光被淬灭基团吸收；在PCR扩增过程中，探针被降解，荧光基团与淬灭基团分离，发出可被检测到的荧光，以此来监测整个PCR过程。（2）SYBR荧光染料法：该方法
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