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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
冷藏
- 保质期:
长期
- 库存:
438
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 规格:
60μl
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域,致力于为客户提供包括EMSA探针-ARE(1.75μM) 凝胶迁移EMSA在内的一系列细胞生物学试剂产品,并提供一系列相关的技术服务。
品牌:百奥莱博
编号:YT203
规格:60μl
产地:国产|进口
EMSA探针-ARE是用于EMSA(也称gel shift)研究的ARE consensus oligonucleotide。这个双链寡核苷酸含有公认的ARE位点,可以用作EMSA研究时的探针。
ARE consensus oligo的序列如下:
5"-ACT GAG GGT GAC TCA GCA AAA TC-3"
3"-TGA CTC CCA CTG AGT CGT TTT AG-5"
ARE即Antioxidant Response Element(抗氧化响应元件),该顺式作用元件含有AP1结合位点,可以和AP1结合,但Nrf2是其更专一性结合的转录因子。例如NQO1(NAD(P)H:quinone oxidoreductase)和HO-1(Heme Oxygenase-1)都受Nrf2通过ARE元件进行转录调控。
本EMSA探针可以使用T4 Polynucleotide Kinase在[γ-32P]ATP存在的情况下进行标记,也可以用于生物素标记。
一个包装的探针可以进行约30个同位素标记探针的反应,每次标记的探针可以测定约100个样品;或约可以进行20个生物素标记探针反应。如果作为未标记的探针用于同位素标记探针的冷竞争(cold competition),可以进行30-60个冷竞争反应。
保存条件:
-20℃保存,一年有效。
注意事项:
避免加热到40℃以上,温度过高会导致双链DNA探针解聚成单链。而单链无法用于EMSA研究。
我公司的EMSA探针-ARE(1.75μM) 凝胶迁移EMSA,性价比高,货期短,送货上门,欢迎您来电咨询购买,另外,我公司还生产供应销售下列产品:
·考马斯亮蓝染色脱色液(常规法)
编号:YT058
英文名称:Commassie Blue Staining Destaining Solution
规格:500ml
本考马斯亮蓝染色脱色液是用于蛋白凝胶考马斯亮蓝染色后脱色的溶液。
本脱色液可以和考马斯亮蓝染色液(P0017B)配套使用。
使用本脱色液进行脱色,采用常规脱色方法至少脱色1小时可以观察到蛋白条带;采用快速脱色方法不足20分钟即可观察到蛋白条带。观察到最清晰的蛋白条带则需脱色更长时间。
本脱色液经过改良,不含有毒的甲醇,但含有刺激性气味的乙酸。
保存条件:
室温保存,至少一年有效。
注意事项:
需自备脱色液。脱色液可以选购考马斯亮蓝染色液(P0017B)。
可以使用枪头盒或适当大小的培养皿作为染色和脱色的容器。
本染色液呈酸性,有轻微腐蚀性,使用时请作必要防护。
·糖原(核酸沉淀用)
编号:YT011
英文名称:Glycogen
规格:500微升
本产品为分子生物学级Glycogen(糖原),不含DNase,不含RNase,可以用作沉淀DNA或RNA的辅助沉淀剂(used as a carrier for the precipitation of DNA or RNA)。
作为DNA或RNA的辅助沉淀剂,大多数情况下glycogen比tRNA或超声处理过的DNA效果更好。由于glycogen中不含DNA和RNA,因此用glycogen作为辅助沉淀剂沉淀下来的核酸更适合于后续的PCR、RT-PCR以及内切酶等核酸酶反应。而tRNA或超声处理过的DNA作为辅助沉淀剂有时会干扰PCR、RT-PCR以及内切酶等核酸酶反应。
据文献报道,连接反应产物用glycogen沉淀后对于后续的细菌转化没有干扰,0.001mg/ml glycogen不会抑制TdT,浓度不大于2mg/ml的glycogen不会影响反转录酶的活力,0.02mg/ml glycogen不会抑制T4 RNA ligase。Glycogen会干扰DNA和蛋白的相互作用。
通常1微升Glycogen (20mg/ml)即可把少至皮克(pg)级的DNA或RNA从1毫升的溶液体系中沉淀出来。每个包装至少足够沉淀500个常规量的DNA或RNA样品。
保存条件:
-20℃保存,至少一年有效。
注意事项:
通常每个样品加入1微升Glycogen(20mg/ml)即可,对于已知糖原可能对后续反应有干扰的情况,可以适当减少糖原用量,或使用tRNA等作为辅助沉淀剂。
使用说明:
1.在待沉淀的DNA或RNA样品中加入1微升Glycogen(20mg/ml),混匀。对于特定的实验操作,糖原的用量可以参考文献或特定的操作说明进行。
2.根据实验需要采用乙醇或其它方法沉淀DNA或RNA。
3.加入乙醇等沉淀试剂,混匀,12,000g左右离心10分钟,即可得到核酸和glycogen的共沉淀物。如果要求尽量沉淀完全,在加入乙醇等沉淀试剂并混匀后,可以-20℃或-80℃冻存数小时或过夜后再离心。
EMSA探针-ARE(1.75μM) 凝胶迁移EMSA关键词:EMSA探针-ARE,YT203,1.75μM
·EMSA/Gel-Shift试剂盒
编号:YT185
英文名称:EMSA/Gel-Shift Kit
规格:100次
EMSA/Gel-Shift试剂盒是用于EMSA(也称gel shift)研究的一个试剂盒。通过EMSA可以研究目的蛋白和特定的DNA序列的结合情况,从而可以研究细胞内一些转录因子的激活水平。本试剂盒提供了进行EMSA实验的探针标记、蛋白和DNA结合以及EMSA上样等的主要试剂,使EMSA实验变得简单方便。
EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X)中含有poly(dI-dC)等有效成分。其中poly(dI-dC)的浓度经过优化,可以很好的消除蛋白和标记探针间的非特异性结合,同时又不会减弱目的转录因子和标记探针间的结合。
每个EMSA/Gel-Shift试剂盒足够标记10-20次探针,足够进行100个蛋白和探针的结合反应。
保存条件:
-20℃保存,一年有效。
注意事项:
需自备待标记的EMSA探针,需自备用于探针标记的同位素,需自备EMSA胶配制的相关试剂。
细胞核蛋白的抽提可以使用我公司生产的细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒(P0028)。
如需做super-shift,需自备用于super-shift的抗体。
本实验涉及到同位素的操作,请严格按照同位素的相关管理条例进行操作。
EMSA探针-ARE(1.75μM) 凝胶迁移EMSA关键词:EMSA探针-ARE,YT203,1.75μM
·Genistein(酪氨酸蛋白激酶抑制剂)
编号:YT325
规格:25mg
Genistein是一种常用的酪氨酸蛋白激酶抑制剂。Genistein可以通透细胞,抑制酪氨酸蛋白激酶(tyrosine protein kinase),抑制许多蛋白的酪氨酸磷酸化。
Genistein分子量为270.24,分子式为C15H10O5,CAS Number:446-72-0。本产品纯度大于98%。
本Genistein为进口分装,可溶解于DMSO。
保存条件:
4℃避光保存,一年有效。-20℃避光保存,至少两年有效。
注意事项:
Genistein可能对人体有害,请注意适当防护。
·生物素随机引物DNA标记试剂盒
编号:YT031
英文名称:Biotin Random Prime DNA Labeling Kit
规格:10次
生物素随机引物DNA标记试剂盒是一种通过随机引物标记反应产生生物素标记DNA探针的试剂盒。本试剂盒标记的生物素DNA探针可以用于常规的Northern、Southern、colony或plaque hybridization、dot或slot blot、原位杂交等。
在Klenow酶(Klenow fragment,3"-5"exo-)催化下,通过随机引物标记反应(random prime labeling)可以把生物素标记的Biotin-11-dUTP掺入到新合成的DNA探针中,这样就可以产生生物素标记的DNA探针。在随机引物标记反应过程中,一些标记好的DNA探针可以被Klenow酶从模板DNA链上驱赶下来。这样在模板量较少的情况下,通过随机引物标记反应,最后可以产生比模板DNA量更多的生物素标记DNA探针,可多达1-15倍左右。
本试剂盒可以用于多种DNA模板的标记,包括DNA*(代"片")断、线性化的质粒或cosmid、超螺旋DNA等。用于本试剂盒的模板DNA*(代"片")断应不小于100bp,小于100bp的DNA模板可以使用我公司生产的生物素3"末端DNA标记试剂盒(D3106)进行DNA探针标记。
用于本试剂盒的模板DNA的量应不少于10ng,推荐的模板用量为100ng-1μg。
本试剂盒中提供了已经用生物素标记好的Biotin-Control DNA,可以用作检测生物素DNA探针标记效率的对照。
生物素标记DNA可以使用我公司生产的化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒(D3308)或其它适当试剂盒进行检测。
本试剂盒可以用于10个标记反应。
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
需自备用于探针标记效率检测的相关试剂。
使用说明:
1. 在一离心管或PCR管内加入100ng-1μg DNA模板,再加入适量试剂盒提供的Ultrapure Water,至总体积为34μl。说明:通常100-300ng DNA模板已经足够用于一次标记反应。
2. 加入10μl Random Primer in Buffer (5X),混匀。如有液滴沾在管壁上,高速离心数秒使所有液体集中在管底。
3. 沸水浴加热5分钟,或在PCR仪上100℃加热5分钟(如果不能设置100℃,99℃加热5分钟也完全可以)。
4. 立即放置到预先准备好的冰水浴中至少2-3分钟。
5. 加入5μl Biotin-Labeling Mix。
6. 加入1μl Klenow Fragment,混匀。如有液滴沾在管壁上,高速离心数秒使所有液体集中在管底。
7. 37℃孵育1小时或过夜(不宜超过20小时)。37℃孵育过夜可以显著增加生物素标记DNA的产量,因此推荐孵育过夜(12-20)小时。
8. 加入3μl探针标记终止液,混匀,终止标记反应。至此标记反应已经全部完成,标记好的DNA可以-20℃保存。
9. 此时探针可以直接用于探针标记效率的检测及Southern、Northern等后续操作。
我公司正在打折促销凝胶迁移EMSA全系列产品,恭候您的咨询选购。
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文献和实验凝胶迁移实验有称凝胶阻滞实验或电泳迁移率实验(EMSA,electrophoretic mobility shift assay),是一种用于蛋白与核算相互作用的技术。最初是用于转录因子与启动子相互作用的验证性实验,也可应用与蛋白-DNA、蛋白-RNA互作研究。 一、实验原理 EMSA主要基于蛋白-探针复合物在在凝胶电泳过程中迁移较慢的原理。根据实验设计特异性和非特异性探针,当核酸探针与样本蛋白混合孵育时,样本中可以与核酸探针结合的蛋白质与探针形成蛋白-探针复合物;这种复合
luozhifeng339 请教各位达达,我准备做EMSA,如果做SUPER-SHIFT的话,该选择原装抗体还是分装的抗体呢,盼不吝赐教! wanglinling 看到一篇EMSA的文章,不知道里面有没有回答你的问题哈,不过英文的值得阅读哈。 GEL SUPER-SHIFT ASSAY/ EMSA Materials/Reagents: See Gel-shift assay Procedure
1. 探针的标记:(1) 如下设置探针标记的反应体系:待标记探针 (1.75pmol/微升) 2微升T4 Polynucleotide Kinase Buffer (10X) 1微升Nuclease-Free Water 5微升[γ-32P]ATP(3,000Ci/mmol at 10mCi/ml) 1微升T4 Polynucleotide Kinase (5-10u/微升) 1微升总体积 10微升按照上述反应体系依次加入各种试剂,加入同位素后,Vortex混匀,再加入T
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