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- 2025年07月13日
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文献和实验一、GST pull-down 基本知识1. GST pull-down 概念GST pull-down：是利用重组技术将探针蛋白与 GST 谷胱苷肽巯基转移酶融合，融合蛋白通过 GST 与固相化在球珠上的 GSH 谷胱甘肽结合。从而分离出能与融合蛋白相互作用的蛋白的技术。2. GST pull-down 研究对象二、GST pull-down 原理1. GST pull-down 结合原理2. GST pull-down 分离原理三、GST pull-down 流程1. 蛋白的抽提与纯化：①
mL PBS 1X 4- Centrifuge (1pulse at 500g) 5- Resuspend in 10 mL PBS 1X (stable for one month at 4 _ C) b) Extract preparation: 1- Transform BL21 or any appropriate bacterial strain with your GST-fused cDNA. Always use freshly transformed cells
with 1/2 volume of 50% GST beads at 4C rocking on the Nutator for 30-60 minutes. 50 ml conical Falcon tubes work well. Pour into a BioRad Column and drain lysate. Save 100 ul of depleted lysate. Load 2.5 ul for SDS-PAGE. Wash beads with 3 column volumes
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