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- 上海莼试
- CS-002-1765
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- 2025年07月11日
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26
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上海莼试
- 肿瘤类型：
详见说明书
- 细胞类型：
未定
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- 细胞形态：
淋巴母细胞样
- 是否是肿瘤细胞：
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- 器官来源：
杂交瘤细胞
- 运输方式：
干冰(第二代培养末期液氮冻存)。
- 年限：
详见说明书
- 生长状态：
半贴壁生长
细胞名称 杂交瘤细胞；2F12
形态特性 淋巴母细胞样
生长特性 半贴壁生长
特征特性 该细胞属专利保藏，其特征特性尚未公开。
培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes)10%FBS
传代方法 1:3传代，3-4天传1次
传代情况 C3
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 阴性
STR
同工酶
染色体
使用权限 未定
杂交瘤细胞；2F12操作步骤：
1）贴壁细胞传代：提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后再放入超净台内，吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞，加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，每隔2~3min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用，用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。
2）悬浮细胞传代：将细胞悬液转移到无菌离心管内，1000rpm离心5min，弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养。
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文献和实验位点） VH5’IgG-GGGGCGGCCGC GTTTTGGCTG[A/C][A/G]GAGAC[A/G/T]GTGA VH3’IgM-GGGGCGGCCGC TGACTCTCTG[A/C][A/G]GAGAC[A/G/T]GTGA 4)小鼠VL3’端引物（引入NotⅠ酶切位点） VL5’-GCGGCGGCCGC AGCCCGTTT[G/T]ATTTCCA[A/G]CTT (2)从杂交瘤细胞提取RNA，反转录成cDNA,均按试剂盒说明书操作。
这首先要从抗体的产生来探讨。把某一抗原免疫某种动物而得到单抗或多抗。如果用经免疫过的动物的脾细胞获得杂交瘤细胞，则得到单克隆抗体，如果用动物的血清，则得到多克隆抗体。但从理论上说，这些抗体都应针对抗原来自的动物，例如如果用 人蛋白 抗原免疫小鼠，则这些 抗体 为鼠抗人。 由于一个大蛋白分子表面具有多种抗原决定簇，因此，免疫动物后，这些不同的决定簇分别诱导动物产生不同的 抗体
瘤来源的动物是相同品系，例如使用SP2/0骨髓瘤细胞时应该选用Balb/C小鼠，同时必须使用品系纯正的小鼠。 （2）培养基中加入了过高浓度的HAT，或者仅A的浓度过高或HT的浓度过低，建议用纯的骨髓瘤和已有的杂交瘤作HAT浓度筛选。 （3）培养基不正确或血清浓度不正确或使用了劣质血清。 （4）未正确制备饲养层细胞。参见本站有关饲养层细胞制备的部份。 （5）接种杂交瘤细胞的培养板过多。一般在5-20块96孔板为宜。 （6）融合后，未及时转移或稀释
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