XH063型细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒说明书

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北京百奥莱博专业生产销售XH063型细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒说明书，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

规格：50T/200T
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
编号：XH063
在研究细胞时经常要研究细胞的不同组份，而研究得最多的两个细胞组份就是细胞核和细胞浆。分离细胞核蛋白和细胞浆蛋白，不仅可以用于研究蛋白在细胞内的定位，而且很多时候分离出来的核蛋白可以用于转录调控方面的研究，例如EMSA(也称gelshift)，footprinting等。
细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒(Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit)提供了一种比较简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提细胞核蛋白与细胞浆蛋白的方法。约90分钟就可以完成培养细胞的细胞核蛋白与细胞浆蛋白的分离。抽提得到的蛋白可以用于Western，EMSA，footprinting，报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。
本试剂盒是通过细胞浆蛋白抽提试剂A和B，在低渗透压条件下，使细胞充分膨胀，然后破坏细胞膜，释放出细胞浆蛋白，然后通过离心得到细胞核沉淀。最后通过高盐的细胞核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。
本试剂盒可以抽提50个样品，如果每个样品的数量为约二百万细胞或约60毫克组织。
包装清单：

保存条件：
-20℃保存，一年有效。
注意事项：
PMSF一定要在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。
抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
本试剂盒对于组织样品，仅适合于新鲜组织，对冻存过的组织抽提效果很差。可以抽提的组织样品数通常不足100个。
使用本试剂盒抽提到的细胞核蛋白与细胞浆蛋白均可直接用我们生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。但不适合用Bradford法测定蛋白浓度。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. 准备溶液：温融解试剂盒中的三种试剂，溶解后立即放置在冰上，混匀。取适当量的细胞浆蛋白抽提试剂A备用，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。取适当量的细胞核蛋白抽提试剂备用，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
2. 对于贴壁细胞：用PBS洗一遍，用细胞刮子刮下细胞，或用EDTA溶液处理细胞使细胞不再贴壁很紧，并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞，尽最大努力吸尽上清，留下细胞沉淀备用。尽量避免用胰酶消化细胞，以免胰酶降解需抽提的目的蛋白。
3. 对于悬浮细胞：用PBS洗一遍，离心收集细胞，尽最大努力吸尽上清，留下细胞沉淀备用。
4. 每20微升细胞沉淀加入200微升添加了PMSF的细胞浆蛋白抽提试剂A。(对于二百万Hela细胞，其细胞沉淀的体积大约为20微升或40毫克。)
5. 最高速剧烈Vortex 5秒，把细胞沉淀完全悬浮并分散开。(如果细胞沉淀没有完全悬浮并分散开，可以适当延长vortex时间。)
6. 冰浴10-15分钟。
7. 加入细胞浆蛋白抽提试剂B 10微升。最高速剧烈Vortex 5秒，冰浴1分钟。
8. 最高速剧烈Vortex 5秒，4℃ 12,000-16,000g离心5分钟。
9. 立即吸取上清至一预冷的塑料管中，即为抽提得到的细胞浆蛋白。可以立即使用，也可以冻存。(千万不要触及沉淀，可以在沉淀上方保留极小体积的上清，以免触及沉淀。)
10. 对于沉淀，完全吸尽残余的上清，加入50微升添加了PMSF的细胞核蛋白抽提试剂。(不吸尽上清会带来细胞浆蛋白的污染。)
11. 最高速剧烈Vortex 15-30秒，把细胞沉淀完全悬浮并分散开。然后放回冰浴中，每隔1-2分钟再高速剧烈Vortex 15-30秒，共30分钟。
12. 4℃ 12,000-16,000g离心10分钟。
13. 立即吸取上清至一预冷的塑料管中，即为抽提得到的细胞核蛋白。可以立即使用，也可以-70℃冻存。
14. 对于新鲜组织：
A. 把组织尽可能切成非常细小的碎片。按照20:1的比例混合适当量的细胞浆蛋白抽提试剂A和B(例如200微升细胞浆蛋白抽提试剂A中加入10微升抽提试剂B)。并加入PMSF至最终浓度为1mM配制成组织匀浆液。按照每60mg组织加入200微升组织匀浆液的比例混合组织和组织匀浆液，并在玻璃匀浆器内充分匀浆。匀浆需在冰浴或4℃进行。
B. 匀浆后把匀浆液转移到塑料离心管内，冰浴放置15分钟。
C. 4℃ 1,500g离心5分钟。把上清转移至一预冷的塑料管中，为抽提得到的部分细胞浆蛋白。(吸上清时千万不要触及沉淀。)
D. 对于沉淀，到了这一步已经充分匀浆，但很多细胞还没有破碎。接下去按照使用说明的步骤4开始操作，即把沉淀当做已经离心收集好的细胞沉淀操作，按照步骤4至步骤13抽提得到细胞浆蛋白和细胞核蛋白。抽提得到的细胞浆蛋白可以和步骤14C中抽提得到的细胞浆蛋白合并。

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·SABC(小鼠IgG)-POD免疫组化试剂盒
编号：XH111
规格：100T
试剂盒组成:
1， 封闭液：10ml，5%BSA
2， Bio-羊抗小鼠IgG：浓缩液100ul。
3， SABC-POD:浓缩液100ul。
4， 稀释液：30ml。
5， 显色液:20×DAB显色液A,20×DAB显色液B
试剂盒简介：
本试剂盒适合于一抗为小鼠IgG的免疫组化实验. DAB显色。
SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，同亲和素一样，对生物素有极高的亲和力，亲和素是一个碱性蛋白质（IP=10），经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex。SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶将保证SABC具有很高的敏感性。
自备试剂：
1．粘片剂多聚赖氨酸
2． 0.01 M PBS（pH7.2-7.4）
3． 0.01M柠檬酸钠缓冲液
4、苏木素
实验步骤:
以石蜡切片热修复为例
1. 切片常规脱蜡至水。
2. 3%H2O2室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
3．可选步聚：a、热修复抗原，将切片浸入0.01M 枸橼酸盐缓冲液（PH6.0）,电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5-10分钟后，反复1-2次。冷却后PBS（pH7.2-7.6）洗涤1-2次。b、酶消化，滴加消化液，37度10分钟， PBS（pH7.2-7.6）洗涤2-3次。c、不处理，直接进入下一步。
4． 滴加5%BSA封闭液,室温20分钟。甩去多余液体, 不洗。
5．用稀释液将一抗（如小鼠抗IL-10）按一定比例稀释（稀释后的一抗4℃可保存一周），也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗，37 ℃ 1小时左右或20℃时2小时左右。也可4℃过夜。PBS（pH7.2-7.4）洗2分钟×3次。（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间。）
6．根据使用量,用稀释液将Bio-羊抗小鼠浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul生物素化羊抗小鼠IgG浓缩液,混匀即成工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加生物素化羊抗小鼠IgG工作液,20-37℃ 30分钟。PBS（pH7.2-7.4）洗2分钟×3次。
7．根据使用量,用稀释液将SABC-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-POD浓缩液，混匀即成SABC-POD工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-POD工作液,20-37℃，30分钟。PBS（pH7.2-7.4）洗5分钟×4次。
8．DAB显色:根据用量，用PBS（pH7.2-7.4）配制，按1mlPBS加入50ul 20×DAB显色液A，加入50ul 20×DAB显色液B 。混匀后加至切片。室温显色, 镜下控制反应时间，一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
9．苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。

对于细胞片，常规固定后，PBS漂洗两次，再用0.5%Txiton X-100室温20分钟，PBS漂洗两次，3%H2O2处理15分钟；PBS漂洗两次，下接上面第4步。

对于冰冻切片，固定后，可用PBS漂洗两次，再接上面第二步。

注意事项：如果染色背景过高，在SABC反应之后，DAB显色之前,用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST（pH7.2-7.4）洗涤切片4次，PBS洗2次，然后DAB显色。

因为免疫组化指标众多，标本不一，此步骤仅作参考。


XH063型细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒说明书关键词：细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒,XH063,百奥莱博

F030641 FITC标记小鼠抗鸡IgY(IgG)抗体 Monoclonal Mouse Anti-Chicken IgY*FITC
ARB13576 兔子白介素4(IL-4)Elisa方法检测 Rabbit interleukin 4,IL-4 ELISA KIT
ARB13275 小鼠雌二醇(E2)elisa测定使用说明书 Mouse estradiol,e2 ELISA KIT
ARB12891 小鼠甲状腺球蛋白(TG)Elisa分析 Mouse thyroglobulin,tg ELISA KIT
间甲氧基苯乙*(代"酸") Carboxymethyl cellulose CM-23 1798-09-0
ARB11779 人新生甲状腺素(NN-T4)ELISA检测服务 Human neonatal thyroxine,nn-t4 ELISA KIT
谷氨酰胺转移酶 Potassium acetate 80146-85-6
85-61-0 辅酶A Coenzyme A hydrate(COA)
BL1300 pUC18
ARB11419 人载脂蛋白A1(Apo-A1)elisa检测说明书 Human apoprotein a1,apo-a1 ELISA KIT
ARB10403 人可溶性细胞因子受体(sCKR)酶标法分析 Human soluble cytokine receptor,sckr ELISA KIT
ARB11184 人视黄酸诱导基因/RIG-1样受体(RLR)elisa检测操作说明书 Human retinoic acid inducible gene/rig-like receptor,rlr-9 ELISA KIT
ARB12287 大鼠抗子宫内膜抗体(EMAb)Elisa分析 Rat endometrium antibody,emab ELISA KIT
F030208 HRP标记山羊抗小鼠IgG1抗体 Goat Anti-Mouse IgG1*HRP
F050306 小鼠IgG抗体 Mouse IgG
PY01-166 溴甲酚紫 ind 10克
BTN111007 MALDI蛋白样品处理试剂盒 MS Sample Preparation Kit
莫西沙星盐酸盐 CBZ-L-Phe 186826-86-8
ARB12850 小鼠水通道蛋白0(AQP-0)Elisa定量检测 Mouse aquaporin 0,aqp-0 ELISA KIT
ARB10107 人His-tag elisa检测
ARB12008 大鼠TGF-β诱导早期基因1(TIEG1)含量检测 Rat tgf-beta-inducible early response gene-1,tieg1 ELISA KIT
ARB12529 大鼠铁蛋白(FE)Elisa方法检测 Rat ferritin,fe ELISA KIT
XH063型细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒说明书关键词：细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒,XH063,百奥莱博


·土壤基因组DNA提取试剂盒
编号：XH018
规格：50T/200T
注：该试剂盒置于室温（15℃-25℃）干燥条件下可保存12个月
产品简介：
本试剂盒采用独特的缓冲液，尽可能的去除腐殖酸。提取的基因组DNA*(代"片")段大，纯度高，质量稳定可靠。
使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
操作步骤：
1，称取土壤样本0.1-0.3g于离心管（强烈建议2ml圆底离心管），加入450ul溶液Ⅰ剧烈震荡混匀1-2min至看不到较大固体块。
2，加入50ul溶液Ⅱ颠倒混匀，65℃水浴5min，每2min混匀一次。
3，加入100ul溶液Ⅲ颠倒混匀，室温12000rpm离心10min。
4，取上清，在上清中加入5ul核酸助沉剂，再加入三倍体积无水乙醇，充分混匀。
4、12000rpm离心5min，弃上清，沉淀加入1ml 70%乙醇，轻轻混匀，再次12000rpm离心5min，弃上清，将离心管在离心机中再次离心30S左右，吸去底部少量液体。
5、 室温放置2min左右，等沉淀边缘微微发白，加入50－100ulTE缓冲液溶解，如很难溶解，可55℃水浴5分钟。
6、电泳或者其他方法检测，进入下游实验。
因为土质千差万别，得到的DNA含量也是相差很大，如果电泳无法检测，可用PCR检测。

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