AXYGEN，T-300,10ul白枪头/吸头

【原创】陈氏克隆简明手册

台上操作），实验室现在往往采用蓝白斑+Amp筛选，这样挑到假阳性克隆的几率比较小。所以倒平板的时候还得额外准备Amp，X-Gel，IPTG，实验过程如下： 在将固体培养基和液体培养基送去高压灭菌之后，要将如下物品放在超净台进行紫外灭菌（时间30分钟）： 烘干的培养皿（进行灭菌的时候，要将报纸撕开，露出培养皿）、黄枪（量程为100μ或者200μ的都可以）、已经灭菌过的黄枪头（没在外面开过的）、酒精灯、打火机、记号笔、酒精棉球、保鲜膜、1.5Ep管（5-10个） 一般高压灭菌的时间

人 iPS 细胞体外分化为气道上皮肺类器官用于呼吸系统疾病研究应用以及iPSC操作指南

细胞。小心不要吸入任何气泡。 5. 将解离的细胞收集在 15 mL 锥形管中。将 1 mL 的单细胞传代培养基添加到孔中，并将收集的所有剩余细胞转移到含有细胞悬液的 15 mL 锥形管中。140 x g 离心试管5分钟并吸出上清液。 6. 将细胞沉淀重悬于 1 mL 单细胞传代培养基中。使用自动细胞计数器或Trypan blue (T8154) 和血细胞计数器计算活细胞总数。 7. 将每孔 1x106个细胞加入ECM Gel (CC131) 涂布后的6孔板中。使用单细胞传代培养基（来自步骤 1 ）。总体

cDNA文库组标准流程

PCR薄壁管，置于冰上，每管先加入17.3μl的灭菌水。 2．用灭过菌的10ul小枪头挑取单克隆白斑至灭菌水中，振荡混匀。 3．依次加入： 10xbuffer     2.5 Mgcl2 (25mM)     1.8 DNTP(2.5mM)     1  T3 引物（10pmol）    1 T7 引物（10pmol）    1  Taq酶    0.4 total     25μl 各试剂均加好后，离心机上甩一下，使之沉底，置于PCR仪上。 4．94℃，2min