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- 2025年07月12日
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- 服务名称：
ELISA
- 提供商：
沃登医学
ELISA(Enzyme-linked Immunosorbnent assay)酶联免疫吸附试验是利用蛋白和聚苯乙烯表面疏水吸附的特性，将抗原-抗体特异性结合反应固定于固相载体表面进行，同时结合酶对底物的高效率催化作用而产生高灵敏的检测效果。ELISA实验用于定量测定，可以有效检测出浓度为pg/L级的待测物。ELISA实验是一种灵敏高效的体外检测手段，广泛用于研究和体外诊断。
ELISA实验原理图
二、ELISA服务内容
方法一：用于检测未知抗原的双抗体夹心法：
1.包被：用0.05 M pH9的碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10 μg/mL，在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1 mL，4°C过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟；
2.加样：加一定稀释的待检样品0.1 mL于上述已包被之反应孔中，置于37℃孵育1小时，然后洗涤（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）；
3.加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1 mL，37°C孵育0.5～1小时，洗涤；
4.加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1 mL，37℃ 10～30分钟；
5.终止反应：于各反应孔中加入2 M硫酸0.05 mL；
6.结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果，反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示；也可测OD值，在ELISA检测仪上，于450 nm（若以ABTS显色，则410 nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
方法二：用于检测未知抗体的间接法：
用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10 μg/mL，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1 mL于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时，洗涤。（同时做空白、阴性及阳性孔对照）于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1 mL，37°C孵育30～60分钟，洗涤，最后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
三、ELISA服务说明
1. 本实验可以检测以下样本：
1) 血清：在室温自然凝固后，离心20分钟（2000-3000 rpm），收集上清。
2) 血浆：根据具体的实验目的选择EDTA，柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后离心20分钟（2000-3000 rpm），取上清进行实验。
3) 尿液、脑脊液等：使用无菌收集管，离心20分钟（2000-3000 rpm）。仔细收集上清完成实验。
4) 细胞培养上清：如果分泌成分在培养基中，可以直接检测上清。如果待测是细胞，应仔细收集细胞，通过反复冻融释放出细胞内成分，离心取上清进行检测。
5) 组织标本：切取标本后称重，加入一定量的PBS或组织蛋白萃取试剂，并加入蛋白酶抑制剂，充分匀浆。离心20分钟左右（ 2000-3000 rpm），收集上清置于-20℃或-80℃ 保存。如有必要，可将样品浓缩干燥，分装后一份待检测，其余冷冻备用。
2.样本保存及传递：
1）3天内测定的标本可放置在4°C，否则需低温冻存运输。
2）周期批量收集的样本即使分装后放在-20°C或-80°C中保存，避免反复冻融。注：2-8 °C可保存 72小时，-20 °C 可保存1个月。-80 °C可保存6个月。
3.实验周期：实验周期一般在收到样品后7-14个工作日；
4.若另有疑问欢迎向本公司咨询，我们将竭诚为您服务。
四、质量承诺
1.权威的ELISA实验结果报告及结果分析（本公司承诺检测结果准确、客观、可信，但不保证得到某一特定结果。）；
2.真实的原始实验数据；
3.详细的实验步骤。
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
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文献和实验酶联免疫吸附实验（ELISA）BIOX.CN 2004-9-7 14:41:36来源：生命经纬基本原理1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。这一方法的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体
一、原理 植物激素（planthormone）免疫定量主要有放射免疫分析（RIA）和酶联吸附免疫分析（ELISA），由于前者操作上欠安全等原因，目前常采用后一种类型。在ELISA中，抗原抗体反应的检测依靠酶标记物来实现，常用的酶有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酯酶。酶可直接标记激素分子，称为酶标植物激素，也可标记于第二抗体（识别抗激素抗体Fc片段的抗体或金黄色葡萄球菌A蛋白），称为酶标二抗。这两类标记物分别用于固相
在现代生物医学研究及临床应用领域，酶联免疫吸附检测术（Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay，ELISA）的使用越来越广。在免疫学研究中，常见的ELISA应用包括检测体液或培养液中抗原（如细胞因子）或抗体的浓度。虽然ELISA技术的操作流程因具体实验目的不同而有差异，其基本思路均是先将已知抗体（或抗原）固定于酶联反应板上，利用抗原-抗体特异性结合的特点，使待检测样本中相应的抗原（或抗体）联结在酶联板上，然后利用针对待检测抗体或抗原的抗体及随后的酶促反应，测定样本中
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